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武漢艾美捷科技有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第6年

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肌動(dòng)蛋白(牛心臟 muscle)說(shuō)明書

時(shí)間:2022/5/19閱讀:271
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大量的疾病和疾病是由引起突變?cè)诘任换虻牡幕蛘{(diào)節(jié)生產(chǎn)肌動(dòng)蛋白或其相關(guān)的蛋白質(zhì)。肌動(dòng)蛋白的產(chǎn)生也是一些病原微生物感染過(guò)程的關(guān)鍵。今天一起來(lái)看看艾美捷肌動(dòng)蛋白(牛心臟 muscle)。

 

艾美捷肌動(dòng)蛋白(牛心臟 muscle)采用Pardee和Spudich法從牛心肌中純化肌動(dòng)蛋白。牛心臟肌動(dòng)蛋白由84%的α心臟肌動(dòng)蛋白和16%的α骨骼肌動(dòng)蛋白亞型組成,分子量約為43 kDa。牛心臟肌動(dòng)蛋白純度大于99%,以白色凍干粉末的形式提供。

 

艾美捷肌動(dòng)蛋白(牛心臟 muscle)生物活性測(cè)定

心臟肌動(dòng)蛋白的生物活性可以通過(guò)其在體外有效聚合成細(xì)絲并在降速分析中與未聚合成分分離的能力來(lái)確定。嚴(yán)格的質(zhì)量控制確保在該試驗(yàn)中,90%以上的肌肉肌動(dòng)蛋白可以聚合。

 

艾美捷肌動(dòng)蛋白(牛心臟 muscle)試劑

1、牛心臟肌動(dòng)蛋白(Cat.#AD99

一般肌動(dòng)蛋白緩沖液(5 mM Tris-HCl pH 8.0,0.2 mM CaCl2;類別#BSA01

3、聚合緩沖液(500 mM KCl20 mM MgCl210 mM ATP;類別#BSA02

4.ATP,100 mM溶液(類別#BSA04

5.1 M DTT(二硫蘇糖醇)

6、精密紅色蛋白分析試劑(Cat.#ADV02

 

艾美捷肌動(dòng)蛋白(牛心臟 muscle)所需設(shè)備

1、4°C下的微凝膠

2、Beckman AirbugeUltra Clear™ 離心管(Cat.#344718)、貝克曼超離心機(jī)和SW 55 Ti轉(zhuǎn)子,帶Ultra Clear™ 離心管(第344718類)和適配器(第356860類),或其他能夠在100000 x g下離心200µl的超離心機(jī)。

3、能夠在600 nm處測(cè)量吸光度的分光光度計(jì)。

 

方法

1.在補(bǔ)充有0.2 mM ATP0.5 mM DTT的普通肌動(dòng)蛋白緩沖液中,將心臟肌動(dòng)蛋白稀釋至0.4 mg/ml

2、在冰上培養(yǎng)1小時(shí),以解聚儲(chǔ)存期間形成的肌動(dòng)蛋白低聚物。

3、將蛋白質(zhì)在4°C微凝膠中以14k rpm離心15分鐘。

4、將上清液轉(zhuǎn)移到新的微濾管中,并用精密紅色蛋白質(zhì)分析試劑測(cè)定總蛋白質(zhì)濃度。將等份200µl肌動(dòng)蛋白溶液放入超離心管中。

6、向每個(gè)充氣管中添加20µl(體積的1/10)聚合緩沖液,并充分混合。

7、在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。

8、在100000 x g的條件下離心試管1小時(shí),使聚合肌動(dòng)蛋白顆粒化。

9、將每根試管頂部90%的上清液移到干凈的微濾管中。

10、用精密紅蛋白分析試劑測(cè)定上清液(未聚合單體肌動(dòng)蛋白)中蛋白質(zhì)的濃度。該蛋白質(zhì)濃度用于確定離心期間肌動(dòng)蛋白聚合和顆粒化的效率。


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