MycoLightTM比率細菌膜電位試劑盒*紅色/綠色熒光*產品，操作簡單，快速，能幫助科研工作者更好的進行科學實驗。

艾美捷 MycoLightTM比率細菌膜電位試劑盒程序如下：

1.在任何合適的培養基中培養細菌。健康細菌的 結果來自對數期培養。在PBS（成分C）或同等無菌緩沖液中，將細菌培養物稀釋至每毫升約106個細胞。細菌可直接從培養基中稀釋，無需清洗。準備足夠的懸浮液，每次試驗提供500 mL。

2.將等分的500µl細菌懸浮液放入流式細胞儀管中，用于進行每次染色實驗。為去J化對照品和未染色對照品準備兩個附加試管。

3.向去J化對照樣品中添加10µl 500µM CCCP（成分B）并混合。

4.添加5µl霉菌染色劑™ 將綠色（100X）（成分A）注入每個流式細胞儀試管并混合（不要向未染色的對照樣品添加染色劑）。在室溫下培養樣品30分鐘。染色樣品可在5分鐘后進行分析，但信號強度持續增加，直到約30分鐘。

5.染色細菌可在配備488 nm激光的流式細胞儀中進行分析。熒光在綠色（熒光素濾光片）和紅色（德克薩斯州紅色濾光片）通道中收集。前向散射、側向散射和熒光應通過對數信號放大進行收集。

6.儀器調整對于檢測相對較小的顆粒（如細菌）尤其重要。使用未染色的對照樣品定位正向和側向散射通道中的細菌種群。使用側散射作為設置采集觸發器的參數。

7.如上所述調整流式細胞儀后，應用去J化對照樣品。使用正向散射和側向散射對細菌進行選通，并調整熒光光電倍增管電壓，使綠色和紅色MFI值大致相等。不要設定補償。

8.紅色和綠色熒光強度的相對數量會隨著細胞大小和聚集而變化，而紅色和綠色熒光強度的比率可以用作膜電位的大小無關的指示器。數據還可以通過使用前向散射和側向散射對細菌進行選通來處理，并使用紅色和綠色熒光點圖分析選通種群，報告MFI值為線性值，而不是通道。

9.在比率直方圖上，在感興趣的峰值周圍設置標記，并記錄平均比率值。對于紅色和綠色熒光的點圖，在感興趣的群體周圍設置區域，并記錄每個群體的紅色和綠色平均熒光強度（MFI）值。為了評估數據，將紅色總體MFI除以綠色總體MFI。

10.在流式細胞儀中，細菌僅根據其大小和染色能力進行鑒定。 通過熒光顯微鏡檢查每個樣品，以確認檢測到的顆粒確實是細菌。

AAT Bioquest Inc 致力于光譜學檢測領域，包括顯色、熒光和生物發光技術。AAT Bioquest的產品幫助 科學家和生物醫藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。艾美捷科技是AAT 的中國代理商，為科研工作者提供優質的比率細菌膜電位試劑盒。