近年來，AAT熒光探針領域陸續(xù)出現(xiàn)了很多優(yōu)質(zhì)的鈣離子探針，這些為實現(xiàn)高通量監(jiān)測鈣濃度，篩選GPCR和鈣離子通道藥物篩選提供了有力的工具。下面一起來看看幾個關于鈣離子探針的常見問題吧~希望能給大家?guī)硪恍椭?/span>

一、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER）鈣離子濃度檢測熒光探針

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是一個復雜的、高度動態(tài)的細胞內(nèi)三維膜系統(tǒng)，在大多數(shù)真核細胞中起著動態(tài)鈣庫的作用。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+緩沖液的特殊排列，以對Ca2+的低親和力為特征，與SERCA泵活性相結(jié)合，使內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+（[Ca2+]L）保持恒定∼0.1–0.8 mM（細胞鈣38:303–310，2005），從而產(chǎn)生針對細胞溶膠的陡峭電化學梯度。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)Ca2+通道的激活導致Ca2+釋放，這有助于[Ca2+]i升高，而SERCA依賴的Ca2+攝取有助于終止胞漿Ca2+信號。

此外，連續(xù)的管腔空間可作為游離Ca2+離子（“Ca2+通道”）的行進路線，從而繞過胞漿Ca2+緩沖液，防止線粒體Ca2+攝取或Ca2+在質(zhì)膜上丟失。

此外，[Ca2+]L的變化調(diào)節(jié)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)駐留的伴侶，負責翻譯后的蛋白質(zhì)處理。因此，[Ca2+]L整合了各種信號事件，并在與ER-Ca2+釋放/攝取相關的快速信號和主要依賴于蛋白質(zhì)合成調(diào)節(jié)的持久適應性反應之間建立了聯(lián)系。

那么，關于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)鈣離子檢測，Cal-520N（Cat# 21146）, Calbryte 520L（Cat# 20640）, Fluo-5N（Cat# 20566）和Mag-fluo4（Cat# 20401)都是可以的。

二、檢測細胞中鈣離子時加入丙磺舒（probenecid）的作用是什么？文獻報導丙磺舒（probenecid）可能會干擾鈣離子通道，比如干擾環(huán)核苷酸門控通道，有沒有可以不用丙磺舒的鈣離子探針？

丙磺舒（probenecid），是一種陽離子轉(zhuǎn)運體抑制劑，用來降低探針進入胞內(nèi)后被排除的幾率，以提高胞內(nèi)信號。常見的Fluo-3 、fluo-4、 Fluo-8都需要加丙磺舒，否則信號會很低。可以選擇Calbryte系列，該系列無需丙磺舒（probenecid）仍會有很好的信號。

三、熒光探針的AM、鹽形式、Dextran葡聚糖形式有什么區(qū)別？

AM酯形式：AM酯形式是一種可以透過細胞膜進入細胞的，不需要其他輔助工具；

鹽形式：鹽形式的Fluo-8不能自行穿過細胞膜，需要輔助進入細胞，如微量注射等；

Dextran葡聚糖形式：若檢測孵育時間久容易發(fā)生區(qū)室化，比如鉆進了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等亞器官內(nèi)，Dextranzui大的優(yōu)勢就是降低了區(qū)室化作用，但是需要顯微注射或其他方式才能進入細胞內(nèi)。

四、樣本中鈣離子定量檢測試劑盒

人體血液里鈣離子的濃度大約在19 -10.5 mg/dL范圍內(nèi)，血液里鈣離子濃度過低或者過高可引起低鈣血癥和高鈣血癥。Amplite 熒光法鈣離子定量試劑盒（Cat#36360）可用于定量體液的鈣離子濃度，可使用96孔或者384孔板經(jīng)酶標儀讀取數(shù)值， 不需進行樣本分離直接檢測，30min可完成，zui低檢測到0.03mM的鈣離子。

五、用于植物細胞（擬南芥原生質(zhì)體）的鈣離子探針

常用的 Fluo-4 AM, Fluo-8 AM 以及 Calbryte 520 AM, 都適用于植物細胞，Fluo-4zui常用，若要獲得更好的信噪比，其升級版本 Calbryte 520 AM更合適。

艾美捷 美國AAT Bioquest Inc。（前身是ABD Bioquest，Inc。）是一家為從事生命科學研究、診斷研發(fā)及藥物開發(fā)的科學家研發(fā)、生產(chǎn)和銷售生物分析研究試劑和試劑盒的公司。公司致力于光譜學檢測領域，包括顯色、熒光和生物發(fā)光技術(shù)。AAT Bioquest的產(chǎn)品幫助科學家和生物醫(yī)藥研究者更好的了解生物化學，免疫學，細胞生物學和分子生物學等領域。作為AAT Bioquest Inc。的中國區(qū)域代理，艾美捷科技為中國客戶提供光譜學檢測技術(shù)并應用于生化、生理代謝和細胞分析領域的產(chǎn)品，包括顯色，熒光和發(fā)光技術(shù)等全系列解決方案。