彗星實驗又稱單細(xì)胞凝膠電泳實驗，是由Ostling等于1984年*提出的一種通過檢測DNA鏈損傷來判別遺傳毒性的技術(shù)。

彗星實驗?zāi)苡行У貦z測并定量分析細(xì)胞中DNA單，雙鏈缺口損傷的程度。當(dāng)各種內(nèi)源性和外源性DNA損傷因子誘發(fā)細(xì)胞DNA鏈斷裂時，其超螺旋結(jié)構(gòu)受到破壞，在細(xì)胞裂解液作用下，細(xì)胞膜、核膜等膜結(jié)構(gòu)受到破壞，細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、RNA以及其他成分均擴(kuò)散到電解液中，而核DNA由于分子量太大不能進(jìn)入凝膠而留在原位。

在中性條件下，DNA 丨 片段可進(jìn)入凝膠發(fā)生遷移，而在堿性電解質(zhì)的作用下，DNA發(fā)生解螺旋，損傷的DNA斷鏈及片段被釋放出來。由于這些DNA的分子量小且堿變性為單鏈，所以在電泳過程中帶負(fù)電荷的DNA會離開核DNA 向正J遷移形成“彗星”狀圖像，而未受損傷的DNA部分保持球形。

DNA受損越嚴(yán)重，產(chǎn)生的斷鏈和斷片越多，長度也越大，在相同的電泳條件下遷移的DNA量就愈多，遷移的距離就愈長。通過測定DNA遷移部分的光密度或遷移長度就可以測定單個細(xì)胞DNA損傷程度，從而確定受試物的作用劑量與DNA損傷效應(yīng)的關(guān)系。

該法檢測低濃度遺傳毒物具有高靈敏性，研究的細(xì)胞不需處于有絲分裂期。同時，這種技術(shù)只需要少量細(xì)胞。

那么，彗星分析實驗（C omet assay）怎么做呢？

C omet Assay kit彗星分析試劑盒內(nèi)提供了彗星分析所需的所有必需試劑，包括裂解液、彗星分析低熔點凝膠、DNA熒光染料、彗星分析玻片以及其它試劑。助您輕松完成彗星實驗分析。

比如OxiSelect™ C omet Assay Kit

OxiSelect™ 3孔彗星分析試劑盒提供了一種快速，方便的方法來篩選一般的DNA損傷，無論損傷的來源或性質(zhì)。試劑盒包括彗星玻片、試劑和熒光染料，用于在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。

用OxiSelect熒光顯微鏡觀察DNA損傷™ 彗星分析試劑盒。

依托泊苷對Jurkat細(xì)胞的治療作用。未經(jīng)依托泊苷處理的Jurkat細(xì)胞（左）和經(jīng)依托泊苷處理的Jurkat細(xì)胞（右）™ 在33V/300ma堿性電泳條件下進(jìn)行15分鐘彗星試驗。

配套的彗星實驗結(jié)果分析軟件

有如下3種主流的軟件可用（均有文獻(xiàn)）。可根據(jù)經(jīng)驗和需求進(jìn)行選擇。

1.OpenC omet：免費；是Image J軟件的一款彗星分析插件；

2.CaspLab （CASP）：免費；獨立軟件；

3.C omet Assay IV：付費軟件；可試用1周

文章來源：艾美捷科技