——精準靶向犬尿氨酸酶（KYNU）的高效科研工具
Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL 是賽默飛世爾科技（Thermo Fisher Scientific）旗下 Pierce 品牌研發的單克隆抗體，專為檢測和定量犬尿氨酸酶（Kynureninase, KYNU）設計。該抗體通過重組人源 KYNU 抗原免疫新西蘭白兔制備，經抗原親和純化，確保高特異性和低背景信號。
核心參數：
貨號：PA542808
規格：100 μg（100 μL）
種屬來源：Rabbit Monoclonal
宿主/亞型：Rabbit IgG
純化類型：抗原親和純化
保存條件：短期（2-8℃），長期（-20℃），避免反復凍融
應用：免疫印跡（WB）、免疫組化（IHC）、免疫熒光（IF）、ELISA
高特異性與靈敏度
WB：1:1000-1:5000 稀釋度下，可檢測 45-50 kDa 人源 KYNU 蛋白。
IHC：1:50-1:200 稀釋度下，人肝組織細胞質呈強陽性染色。
IF：0.5-2 μg/mL 濃度下，HeLa 細胞中 KYNU 定位清晰。
抗原設計：基于人源 KYNU 重組蛋白（覆蓋氨基酸序列片段），與鼠源（高序列一致性）和大鼠源（高序列一致性）同源蛋白具有交叉反應性。
驗證數據：
穩定的質量控制
每批次抗體均通過 WB、IHC 和 ELISA 驗證，確保批間一致性。
提供 RRID（如適用），支持實驗結果的可重復性驗證。
靈活的應用場景
WB：適用于檢測內源性或過表達 KYNU 蛋白。
IHC：適用于石蠟切片或冰凍切片，可結合 DAB 或熒光底物顯色。
IF：適用于活細胞或固定細胞，可與其他細胞器標記物共定位分析。
試劑與耗材
抗體：Thermo PA542808 KYNU ANTIBODY 100 μL
封閉液：5% BSA 或 10% 脫脂奶粉（PBST 配制）
一抗稀釋液：PBST + 0.1% Tween-20
二抗：根據實驗選擇 HRP 或熒光標記抗兔 IgG
樣本準備
WB：細胞裂解液（含蛋白酶抑制劑）或組織勻漿液，蛋白濃度 1-5 μg/μL。
IHC：石蠟切片脫蠟至水，或冰凍切片固定。
IF：多聚甲醛固定細胞，0.1% Triton X-100 透化。
WB
電泳：8-12% SDS-PAGE，上樣 20-50 μg 蛋白。
轉膜：PVDF 膜，200 mA 恒流轉膜 90 分鐘。
封閉：5% BSA，室溫孵育 1 小時。
一抗孵育：PA542808 抗體（1:2000 稀釋），4℃ 過夜。
二抗孵育：HRP 標記抗兔 IgG（1:5000 稀釋），室溫 1 小時。
顯色：ECL 底物，化學發光成像。
IHC
抗原修復：檸檬酸鹽緩沖液（pH 6.0）高壓修復 10 分鐘。
封閉：10% 羊血清，室溫 30 分鐘。
一抗孵育：PA542808 抗體（1:100 稀釋），4℃ 過夜。
二抗孵育：HRP 標記抗兔 IgG（1:200 稀釋），室溫 30 分鐘。
顯色：DAB 底物，蘇木精復染。
IF
封閉：10% 羊血清，室溫 1 小時。
一抗孵育：PA542808 抗體（1 μg/mL），4℃ 過夜。
二抗孵育：Alexa Fluor 488 標記抗兔 IgG（1:500 稀釋），室溫 1 小時。
核染色：DAPI（1 μg/mL），室溫 5 分鐘。
WB：使用 ImageJ 或 AlphaView 軟件定量條帶灰度值。
IHC：通過 ImageJ 或 Halo 軟件分析陽性細胞比例。
IF：使用共聚焦顯微鏡采集圖像，分析共定位系數。
抗體稀釋優化
建議從 1:1000 開始梯度稀釋，根據實驗結果調整。
避免重復凍融，分裝后保存。
內參選擇
WB：推薦使用 GAPDH 或 β-Actin 作為內參。
IHC：可結合 DAPI 染色評估細胞核完整性。
對照設置
陽性對照：已知表達 KYNU 的細胞系（如 HepG2、HeLa）。
陰性對照：省略一抗或使用同型對照抗體。
安全規范
抗體僅供科研使用，不可用于人體或動物實驗。
操作時佩戴手套，避免直接接觸。
操作細節
WB：轉膜后需用麗春紅染色確認轉膜效率。
IHC：抗原修復后需充分冷卻至室溫，避免非特異性結合。
IF：透化時間需根據細胞類型優化，避免過度透化。
故障排除
高背景：增加封閉時間或提高抗體稀釋度。
無信號：檢查一抗保存條件，或延長孵育時間。
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