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國產液相色譜廠家談正相色譜與反相色譜的區別
國產液相色譜廠家談正相色譜與反相色譜的區別
液相色譜儀正相與反相區別在液相色譜儀分析中，根據流動相和固定相相對極性的不同，可分為正相色譜和反相色譜。所謂正相色譜是指固定相極性大于流動相極性的情況，反之，固定相的極性小于流動相的極性，則稱為反相色譜。
由于極性化合物更容易被極性固定相所保留，所以正相色譜系統一般適用于分離極性化合物，極性小的組分先流出。相反，反相色譜系統一般適用于分離非極性或弱極性化合物，極性大的組分先流出。因此在應用上，正相色譜用于分離極性較大的物質，如蛋白質、生物堿等。反相色譜多用于分離極性較小的物質，在流動相的選擇上，反相色譜的優勢更大，在實際工作中反相色譜的應用更為廣泛。
正相色譜用的固定相通常為硅膠，以及其他具有極性官能團，如胺基團和氰基團的鍵合相填料。由于硅膠表面的硅羥基或其他團的極性較強，因此，分離的次序是依據樣品中的各組份的極性大小，即極性弱的組份先被沖洗出色譜柱。
反相色譜填料常是以硅膠為基礎，表面鍵合有極性相對較弱的官能團的鍵合相。反相色譜所使用的流動相極性較強，通常為水，緩沖液與甲醇，已腈等混合物。樣品流出色譜柱的順序是極性較強組合先被沖出，而極性弱的組份會在色譜柱上有更強的保留。常用的反相填料有C18、C8、C4、C6H5等。
反相液相色譜柱效高、分離能力強、保留機理清楚，是液相色譜分離模式中使用為廣泛的一種，對于生物大分子、蛋白質及酶的分離分析，反相液相色譜正受到越來越多的關注。反相色譜法是以表面非極性載體為固定相，以比固定相極性強的溶劑為流動相的一種液相色譜分離模式。反相色譜固定相大多是硅膠表面鍵合疏水基團，基于樣品中的不同組分和疏水基團之間疏水作用的不同而分離。在生物大分子分離中，多采用離子強度較低的酸性水溶液，添加一定量乙腈、異丙醇或甲醇等與水互溶的有機溶劑作流動相。普通的反相色譜固定相和孔徑大于300Å的硅膠鍵合烷基固定相應用較為普遍，聚合物基質的反相色譜固定相也有較多應用。