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液相色譜的五大基本系統有什么不同?

閱讀:1816        發布時間:2019/5/5
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液相色譜(HPLC)法是以高壓下的液體為流動相,并采用顆粒極細的固定相的柱色譜分離技術。液相色譜對樣品的適用性廣,不受分析對象揮發性和熱穩定性的限制,因而彌補了氣相色譜法的不足。在目前已知的有機化合物中,可用氣相色譜分析的約占20%,而80%則需用液相色譜來分析。
 
液相色譜的五大進樣系統:
 
1、進樣系統
進樣系統分為手動進樣閥和自動進樣器。
2、輸液系統
輸液泵按輸出液恒定的因素分恒壓泵和恒流泵。對液相色譜分析來說,輸液泵的流量穩定性更為重要,這是因為流速的變化會引起溶質的保留值的變化,而保留值是色譜定性的主要依據之一。因此,恒流泵的應用更廣泛。
 
輸液泵按工作方式分為氣動泵和機械泵兩大類。機械泵中又有螺旋傳動注射泵、單活塞往復泵、雙活塞往復泵和往復式隔膜泵。
3、分離系統
分離系統包括色譜柱、保護柱以及柱溫箱。
色譜柱:色譜柱是樣品分離的核心。色譜柱在使用前必須仔細閱讀說明書,了解色譜柱使用的pH值范圍、溶劑耐受范圍、壓力范圍和維護方法等事項。色譜柱使用完后,需及時對色譜柱進行沖洗。沖洗完成后,應該將色譜柱從儀器上拆下來,兩端用廠家配的堵頭密封后,保存在色譜柱盒里。
保護柱:保護柱的作用主要是防止吸附性強的雜質對色譜柱污染,從而延長色譜柱的壽命。針對不同型號的色譜柱,應選擇相對應填料的保護柱。應注意柱芯也是有壽命的,應該定期進行更換。
柱溫箱:色譜柱溫度變化,可能會導致保留時間的變化。為了避免這個問題,建議使用柱溫箱。
4、檢測系統
液相色譜常用的檢測器有紫外檢測器、示差折光檢測器和熒光檢測器三種。
(1)紫外檢測器
該檢測器適用于對紫外光(或可見光)有吸收性能樣品的檢測。其特點是,使用面廣(如蛋白質、核酸、氨基酸、核苷酸、多肽、激素等均可使用)、靈敏度高(檢測下限為10-10g/ml)、線性范圍寬、對溫度和流速變化不敏感、可檢測梯度溶液洗脫的樣品。
(2)示差折光檢測器
凡具有與流動相折光率不同的樣品組分,均可使用示差折光檢測器檢測。目前,糖類化合物的檢測大多使用此檢測系統。這一系統通用性強、操作簡單,但靈敏度低(檢測下限為10-7g/ml),流動相的變化會引起折光率的變化,因此,它既不適用于痕量分析,也不適用于梯度洗脫樣品的檢測。
(3)熒光檢測器
凡具有熒光的物質,在一定條件下,其發射光的熒光強度與物質的濃度成正比。因此,這一檢測器只適用于具有熒光的有機化合物(如多環芳烴、氨基酸、胺類、維生素和某些蛋白質等)的測定,其靈敏度很高(檢測下限為10-12~10-14g/ml),痕量分析和梯度洗脫樣品的檢測均可采用。
5、數據處理系統
該系統可對測試數據進行采集、貯存、顯示、打印和處理等操作,使樣品的分離、制備或鑒定工作能正確開展。

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