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國(guó)產(chǎn)液相色譜柱如何沖洗你知道么
國(guó)產(chǎn)液相色譜柱如何沖洗你知道么
我們首先預(yù)熱下國(guó)產(chǎn)液相色譜柱的相關(guān)參數(shù)：
1.表面積
顆粒外表面和內(nèi)部孔表面的總和，以m2/gram表示。
高表面積對(duì)于多組份樣品的分離具有較強(qiáng)的保留能力，柱容量和分離度。表面積低的填料通常能迅速達(dá)到平衡狀態(tài)，對(duì)于梯度淋洗尤為重要。
2.孔徑
顆粒的孔或腔的平均尺寸，范圍60-10,000Å。
大孔的填料顆粒可以延長(zhǎng)溶質(zhì)大分子在填料表面滯留的時(shí)間，達(dá)到充分分離，改善峰形；樣品MW≤4000,選擇80Å的孔徑，樣品MW＞4000選擇300Å的孔徑。
3.碳覆蓋率
對(duì)液相色譜分離的影響，與基體物質(zhì)相連的鍵合相的量。高碳覆蓋率可以提高分辨率，分析時(shí)間長(zhǎng)。低碳覆蓋率縮短運(yùn)行時(shí)間。
4.封端/封尾
封端對(duì)色譜分離的影響，使用較短烷烴鏈鍵合游離硅羥基（二次鍵合）。封端就是減輕待測(cè)組份與硅膠表面殘留的酸性硅羥基反應(yīng)而引起的色譜峰拖尾現(xiàn)象，對(duì)于極性樣品，未封端與經(jīng)過(guò)封端處理的色譜柱在選擇性上有明顯差異。
5.粒徑
1.8um-3.5um便于快速分離，5um是行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，7um是制備柱。
如何沖洗液相色譜柱呢？
1.對(duì)于反相色譜柱的沖洗
用以下溶劑至少各25mL沖洗色譜柱(分析柱)：
不含緩沖鹽的流動(dòng)相、100%甲醇、100%乙腈、75%乙腈+25%異丙醇、100%異丙醇、100%二氯甲烷、100%己烷。注意若使用己烷或二氯甲烷沖洗色譜柱，則在重新使用反相流動(dòng)相以前，必須用異丙醇沖洗色譜柱。
2.對(duì)于正相色譜柱的沖洗
用以下溶劑至少各50mL沖洗色譜柱(分析柱)：50%甲醇+50%CH4CL3、100%乙酸乙酯。