DH5 aλpir感受態(tài)細(xì)胞*

產(chǎn)品貨名：DH5αλpir Chemically Competent Cell
產(chǎn)品貨號(hào)：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)
規(guī)格/簡(jiǎn)介：G6018-10(10支100ul)、G6018-100(100支100ul)

基因型

F- φ80 lac Z△M15△(lacZYA- -arg F) LAMpir U169 endA1

recAl hsdR17(rk- ， mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA

簡(jiǎn)要說(shuō)明|

CLBio DH5a入pir 菌株來(lái)源于DH5a，在DH5a大腸桿菌基因組中引入LAMpir，即為DH5a入pir，該菌株可以表達(dá)PIR蛋白，使得含有R6Kg ori 復(fù)制子的質(zhì)粒可以在其中正常復(fù)制。DH5a入pir 菌株缺失核酸內(nèi)切酶(endA)，提高了質(zhì)粒DNA的產(chǎn)量和質(zhì)量;重組酶缺陷型(recA)減少插入片段的同源重組概率，保證了插入DNA的穩(wěn)定性; lacZOM15 的存在使DH5a可用于藍(lán)、白斑篩選;但DH5a入pir 菌株生長(zhǎng)速度較慢，在平板培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)生長(zhǎng)時(shí)間。CLBio DH5a λpir感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>1X109 cfu/ μg DNA。

操作說(shuō)明：

1. DH5a λpir 感受態(tài)細(xì)胞從-80°C拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手打EP管底混勻，冰中靜置25分鐘。

2.42*C水浴熱激45秒，迅速放回冰.上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700 μ1不含抗生素的無(wú)菌LB培養(yǎng)基，混勻后37°C，200 rpm復(fù)蘇70分鐘。

4. 5000 rpm離心1分鐘收集菌體，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懇菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37°C培養(yǎng)箱至少18小時(shí)。

注意事項(xiàng)：

1.感受態(tài)細(xì)胞建議在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA,不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2.DH5aλpir菌株生長(zhǎng)緩慢，在平板上培養(yǎng)或液體搖菌時(shí)應(yīng)延長(zhǎng)菌體生長(zhǎng)時(shí)間(37°C， 18 小時(shí)以上)。

3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

DH5 aλpir感受態(tài)細(xì)胞*