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DH5a感受態(tài)細(xì)胞
產(chǎn)品名稱：DH5a Chemically Competent Cell
產(chǎn)品編碼: G6016
保存條件: -80°C
貨號(hào)、數(shù)量、規(guī)格: G6016-20 (20支100u1)、G6016-100 ( 100支100u1)|
pUC19 ( control vector) 10pg/ μ 1; 10μ 1
基因型
F-φ80 lac Z△M15△(lacZYA-arg F) U169 endAl recAl
hsdR17 (rk- , mk+) supE44 λ- thi -1 gyrA96 relAl phoA
操作說(shuō)明|
1. CLBio DH5a感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化(或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中)，加入目的DNA (質(zhì)粒或連接產(chǎn)物)并用手打EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。
2.42°C水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3.向離心管中加入700 μ 1不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基(2YT或LB)混勻后37°C，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。
4.5000rpm離心一分 鐘收菌，留取100 μ 1左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5.將平板倒置放于37°C培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放37°C培養(yǎng)至少17h。
注意事項(xiàng)
1. CLBio感受態(tài)細(xì)胞建議在冰上融化。冰上放置大約5分鐘即可融化，融化后8分鐘內(nèi)加入質(zhì)粒,否則會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。
2.混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。
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