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轉(zhuǎn)染試劑線性PEI溶液的配制（1mg/ml）

聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）是聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽(yáng)離子電荷密度的有機(jī)大分子，每相隔二個(gè)碳個(gè)原子，即每“第三個(gè)原子都是質(zhì)子化的氨基氮原子，使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。PEI，可用作轉(zhuǎn)染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞。有實(shí)驗(yàn)證明，分子量為25000的線性PEI即Polysciences 23966轉(zhuǎn)染效率zui高。

下面將主要介紹polysciences 線性PEI(#23966)的產(chǎn)品特性及其溶液的配制過(guò)程。

1. 產(chǎn)品特性:

產(chǎn)品名稱：線性聚乙烯亞胺(PEI)

CAS號(hào)	9002-98-6，26913-06-4	分子式	(CH2CH2NH)n	分子量	25000
熔點(diǎn)	73-75°C	外觀	白色或黃色固體	結(jié)構(gòu)式
溶解性	溶于熱水，低pH值的冷水，甲醇和乙醇；不溶于：苯，aether和丙酮	儲(chǔ)存	室溫

 

2. 溶液配制

此指導(dǎo)說(shuō)明書是經(jīng)polysciences公司研究，測(cè)試及其客戶反饋的后編寫的。下面推薦一種簡(jiǎn)單適用而高效的方法，講述如何配制濃度為1mg/mL的轉(zhuǎn)染試劑的配制。

材料：

1g #23966、1L 純水（Milli-Q®純水，注射用水（WFI），或類似的生物級(jí)水）、12 M鹽酸、10 M氫氧化鈉、一次性0.1-0.2µm PES真空無(wú)菌過(guò)濾器、無(wú)菌高聚乙烯或聚丙烯試劑瓶。

器材：

1 L 玻璃燒杯、1 L玻璃量筒、核準(zhǔn)pH計(jì)、2支1 mL塑料移液管、托盤、聚四氟乙烯（PTFE）攪拌棒、真空泵

配制過(guò)程：

1g #23966——900mL水溶解——攪拌、加熱（60-80°C）——加HCl調(diào)pH到2.0左右——蓋上燒杯，攪拌3h（直至粉末*溶解）——冷卻至室溫——加NaOH調(diào)pH到6.9-7.1——移液到量筒，加水補(bǔ)足至1L——真空過(guò)濾消毒——分裝，-20°C保存。

備注：加熱或加酸都有助于PEI溶解。當(dāng)然酸可能不用加那么多，詳細(xì)用量可試加一點(diǎn)攪拌看看，足夠溶解就行，不一定需要加到pH那么低。

試劑儲(chǔ)存：

冷凍部分溶液可在-20°C保存長(zhǎng)達(dá)一年；部分解凍的溶液可在4°C保存2周，不可反復(fù)凍融。

粉末儲(chǔ)存：

未開封的粉末有效期兩年。可在室溫下保存直至使用。