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第三代促甲狀腺激素受體抗體檢測(cè)產(chǎn)品的性能評(píng)估
閱讀：1371 發(fā)布時(shí)間：2022-10-17
Graves病患者血清中，TSH受體自身抗體（TRAb）的病理作用已經(jīng)明確。目前，檢測(cè)TSHR自身抗體有兩種方法。一種方法是基于類似TSH的自身抗體在細(xì)胞系中誘導(dǎo)第二信使cAMP的能力，稱為生物測(cè)定(bioassay)方法，該方法能夠根據(jù)其增強(qiáng)或抑制cAMP合成的生物活性來區(qū)分刺激性抗體（TSAb）和阻斷性抗體（TSBAb）。另一種方法是基于豬TSHR或人類重組TSHR的TRAb檢測(cè)，患者血清中的TRAb和牛TSH（用I-125或生物素標(biāo)記）共同競(jìng)爭(zhēng)TSHR上的結(jié)合位點(diǎn)。
Smith博士（RSR公司創(chuàng)始人）初次報(bào)道了一種測(cè)定血清TRAb的新方法[1]，其中，患者血清中的TRAb可與生物素標(biāo)記的促甲狀腺激素受體人單克隆刺激型抗體M22[1]產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)，抑制M22與ELISA板孔上包被的TSHR的結(jié)合，以競(jìng)爭(zhēng)抑制法構(gòu)建酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）[2]。
本研究旨在比較兩代和三代TRAb檢測(cè)方法的性能差異，二代為抗體競(jìng)爭(zhēng)抑制TSH，三代為抗體競(jìng)爭(zhēng)抑制M22。此外，我們?cè)u(píng)估了三代TRAb檢測(cè)產(chǎn)品在鑒別未經(jīng)治療的Graves病（GD）患者和無痛性甲狀腺炎（PT）患者上的應(yīng)用前景。
研究對(duì)象
檢測(cè)方法
圖1展示了基于M22的測(cè)定（表述為第三代TRAb，以TRAb3rd表示）和基于抑制TSH-生物素的測(cè)定（表述為第二代TRAb測(cè)定，以TRAb2nd表示）的檢測(cè)原理。
圖1 二代和三代TRAb檢測(cè)原理。二代TRAb利用待測(cè)TRAb與TSH-生物素形成競(jìng)爭(zhēng)抑制，抑制其與固相TSHR結(jié)合；三代TRAb利用待測(cè)TRAb與M22-生物素形成競(jìng)爭(zhēng)抑制，抑制其與固相TSHR結(jié)合。
臨界值定義以及統(tǒng)計(jì)分析
研究分析了230名健康對(duì)照者的血清抗體，只有1名（0.43%）對(duì)M22結(jié)合值的抑制率大于臨界值15%（32.8%）。
從244例未經(jīng)治療的GD患者中計(jì)算靈敏度（真陽性結(jié)果），并從三個(gè)對(duì)照組中計(jì)算特異性（真陰性結(jié)果）。二代TRAb檢測(cè)特異性*，靈敏度99.2%時(shí)，抑制率臨界值為22%。
為了確認(rèn)三代TRAb產(chǎn)品的臨床臨界值，我們對(duì)244例未經(jīng)治療的GD患者（疾病組）和三個(gè)不同對(duì)照組（下表）進(jìn)行了檢測(cè)，并對(duì)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行了ROC曲線分析。
第三代TRAb檢測(cè)在三組對(duì)照中的抑制率臨界值分別為14.5%（a）、22.0%（b）和22.0%（c），靈敏度均為99.6%，特異性分別為99.6%（a）、96.6%（b）和97.5%（c）（圖2）。
圖2 三代TRAb不同對(duì)照組間ROC曲線。a:疾病組+對(duì)照組1；b：疾病組+對(duì)照組2；c:疾病組+對(duì)照組3。
根據(jù)結(jié)果建議三代TRAb抑制率臨界值為15%。
二代和三代TRAb檢測(cè)對(duì)比
在15%的臨界值下，第三代TRAb對(duì)于新診斷GD、PT和SAT患者的血清樣本靈敏度和準(zhǔn)確性與第二代相比如表1所示，數(shù)值分布如圖3所示。
圖3 二代與三代TRAb在不同患者組間檢測(cè)數(shù)值分布圖
注：a組為三代TRAb分別在GD、PT以及SAT三組間檢測(cè)值分布；b組為二代TRAb在三組間分布。
在244例未經(jīng)治療的Graves病患者中，三代檢測(cè)與二代檢測(cè)結(jié)果高度相關(guān)（r=0.911），但三代檢測(cè)（243例，99.6%）的抗體陽性率高于二代檢測(cè)（242例，99.2%）。在對(duì)照組中，三代檢測(cè)在9.2%的PT組和6.7%的亞急性甲狀腺炎（SAT）組中檢出抗體；二代檢測(cè)在16.8%的PT組和13.3%的SAT組中檢出抗體。
表1 二代與三代TRAb在三個(gè)疾病組間陽性率的比較
綜合來看，三代TRAb在GD組檢出率更高，PT組和SAT組檢出率更低，整體性能更優(yōu)。與二代檢測(cè)相比，三代檢測(cè)對(duì)GD和PT的診斷準(zhǔn)確性顯著提高（p=0.0026）。
圖4 二代與三代TRAb間結(jié)果相關(guān)性比較。橫軸為三代TRAb，縱軸為二代TRAb。
討論
甲狀腺功能亢進(jìn)的流行病學(xué)數(shù)據(jù)差異較大。在日本等碘攝入量高的國(guó)家及地區(qū)，大多數(shù)甲狀腺毒癥病例是由GD和PT引起的，而在碘攝入量低的地區(qū)，GD和毒性多結(jié)節(jié)性甲狀腺腫是甲狀腺功能亢進(jìn)的常見原因[4]。在目前的臨床實(shí)踐中，需要在甲狀腺毒癥患者中檢測(cè)TRAb以鑒別GD患者。在本研究中，我們證實(shí)了基于M22-生物素競(jìng)爭(zhēng)抑制的ELISA方法（三代TRAb）在診斷GD以及鑒別GD和PT引起的甲狀腺毒癥患者方面的高靈敏度。
我們的結(jié)果最終表明，在患有GD和PT的甲亢患者中，基于M22第三代TRAb檢測(cè)的準(zhǔn)確性為96.7%，顯著優(yōu)于第二代TRAb準(zhǔn)確性為93.9%（p=0.0026）。尤其是在GD和PT患者的鑒別診斷上，三代檢測(cè)性能顯著優(yōu)于二代。新方法的在預(yù)測(cè)停藥后GD的預(yù)后情況，以及自身抗體與Graves眼病的關(guān)系上的臨床價(jià)值有待進(jìn)一步發(fā)掘。
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參考文獻(xiàn)：Kamijo K , Ishikawa K , Tanaka M . Clinical Evaluation of 3rd Generation Assay for Thyrotropin Receptor Antibodies : The M22-biotin-based ELISA Initiated by Smith[J]. Endcor J, 2005, 52.