多靶點(diǎn)激酶抑制劑（ENMD-2076）公司正在出售的產(chǎn)品：Visfatin-2(CT)/FITC 熒光標(biāo)記內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪（C端抗體）IgG
VPS18/FITC 熒光標(biāo)記空泡分選蛋白18抗體IgG
VR1/FITC 熒光標(biāo)記辣椒受體抗體IgG
VSIG4 /FITC 熒光標(biāo)記T淋巴負(fù)調(diào)節(jié)蛋白之一抗體IgG
VSV-G tag/FITC 熒光標(biāo)記VSV-G tag標(biāo)簽抗體IgG
VSV-G

商品介紹：

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

大腸埃希氏菌Aneurinibacillus sp.大鼠前列腺F(PGF)

熒光假單胞菌Aneurinibacillus sp.大鼠前列腺E1(PGE1)

炭黑曲霉Aneurinibacillus sp.大鼠前列腺E1(PGE1)

松口蘑Bacillus sp.大鼠皮質(zhì)/腎上腺(CORT)

團(tuán)聚莖點(diǎn)霉Halobacillus sp.大鼠皮質(zhì)/腎上腺(CORT)

加納醋桿菌Paenibacillus sp.大鼠內(nèi)皮1(ET-1)

枯草芽胞桿菌Halobacillus sp.大鼠內(nèi)皮1(ET-1)

黑綠青霉Paenibacillus sp.大鼠血管舒緩激肽(BK)

中華游動(dòng)微菌Bacillus sp.大鼠血管舒緩激肽(BK)

釀酒酵母Bacillus sp.大鼠抵抗(Resistin)

包比鏈霉菌Halobacillus sp.大鼠抵抗(Resistin)

谷棒桿菌Bacillus sp.大鼠催乳(PRL)

燕麥鐮孢Bacillus sp.大鼠催乳(PRL)

大腸埃希氏菌Bacillus sp.大鼠促生長(zhǎng)激釋放激(GRH)

產(chǎn)氣莢膜梭菌 A型Bacillus sp.大鼠促生長(zhǎng)激釋放激(GRH)

秦氏蜜環(huán)菌Aeromonas sp.大鼠促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)

小鼠抗促甲狀腺抗體氣微菌流產(chǎn)布魯氏菌 生物Ⅵ型

瞬時(shí)表達(dá)軸索糖蛋白1抗體茄科雷爾氏菌Alternaria angustiovoidea

乳腺癌雌激誘導(dǎo)蛋白抗體馬鏈球菌獸瘟亞種(馬鏈球菌動(dòng)物傳染病亞種)Amycolatopsis keratiniphila subsp. nogabecina

金屬蛋白組織抑制因子-1抗體C端冷解糖芽孢桿菌Chlamydomyces palmarum
多靶點(diǎn)激酶抑制劑（ENMD-2076）禾旋孢腔 D-阿伯糖

米根霉 D-纖維二糖

厚垣孢普可尼亞 N-乙酰-D-氨基葡萄糖

plenti dCAS-VP64-Blast(Plasmid#61425) 鹽酸氨基葡萄糖

嗜中溫冷桿 6-磷酸葡萄糖鋇鹽

大球蓋菇 D-葡萄糖-1-磷酸二鈉

白色倫茨氏 D-葡萄糖-6-磷酸單鈉鹽

嗜中溫生孢產(chǎn)醋桿狀 D-葡萄糖-6-磷酸二鈉鹽

柳巴克酵母 D-葡萄糖-6-磷酸三鈉鹽

大腸埃希氏 D-葡萄糖一水物

釀酒酵母 D-半乳糖酸

平菇 D-氨基半乳糖鹽酸鹽

沙福芽孢桿 D-果糖-1，6-二磷酸三鈉

細(xì)粒黃桿 D-果糖-6-磷酸二鈉

地衣芽孢桿 D-果糖