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詳細介紹
商品介紹：
Mitapivat是R型酮酸激酶(PKR)有效抑制劑，對突變型PKR也有抑制活性。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1260075-17-9 純度：99.72% 分子量：450.55 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
產品屬性：
中文名稱：PKR抑制劑（Mitapivat）
英文名稱：Mitapivat
產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
發貨周期：1～3天
公司產品僅用于科研
細胞生物學研究有以下幾個方面：
細胞生物學的研究內容十分廣泛,主要包括：
①細胞核、染色體以及基因表達的研究；
②生物膜與細胞器的研究；
③細胞骨架體系的研究；
④細胞增殖及其調控；
⑤細胞分化及其調控；
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡)；
⑦細胞的起源與進化；
⑧細胞工程.
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
燼灰吸水鏈霉菌Bacillus sp.大鼠孕激/孕(PROG)
腐殖質類芽胞桿菌Halobacillus sp.大鼠雌激(E)
葡萄座腔菌Aeromonas sp.大鼠雌激(E)
松鼠葡萄球菌松鼠亞種Halobacillus sp.大鼠血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)
米曲霉Bacillus sp.大鼠血管內皮粘附分子1(VCAM-1/CD106)
總狀共頭霉Paenibacillus sp.大鼠白介8(IL-8/CXCL8)
凍干粉 克羅諾桿菌屬（阪崎腸桿菌）（陽性） Aeromonas sp.大鼠白介8(IL-8/CXCL8)
光滑青霉Gluconobacter sp.大鼠脂聯(ADP)
大腸埃希氏菌Bacillus sp.大鼠脂聯(ADP)
微黃棒桿菌Bacillus sp.大鼠游離β絨毛膜促性腺激(f-βCG)
灰離褶傘(松毛菇)Bacillus sp.大鼠游離β絨毛膜促性腺激(f-βCG)
宇佐曲霉Bacillus sp.大鼠固(ALD)
大腸埃希氏菌Aeromonas sp.大鼠固(ALD)
假單胞菌屬Bacillus sp.大鼠去甲腎上腺(NA)
釀酒酵母Pseudomonas sp.大鼠去甲腎上腺(NA)
油菜假單胞菌Bacillus sp.大鼠前列腺F(PGF)
睪丸特異定蛋白質編碼Y1抗體托氏假單孢菌山羊葡萄球菌
腫瘤壞死因子受體相關蛋白4抗體解淀粉類芽孢桿菌豬葡萄球菌
腫瘤壞死因子受體相互作用蛋白抗體寡養單胞菌洲馬瘟病毒（VI型）
微管蛋白βtubulin抗體Tubulinβ泛菌洲馬瘟病毒（IX型）
PKR抑制劑（Mitapivat）香菇—蘇香 乳果糖
乳桿屬 乳糖酸
貝倫格葡萄座腔 乳糖
忽視擬盤多毛孢 凝膠多糖
釀酒酵母 糖原
E.coli DH5α β-谷甾
大腸埃希氏(大腸桿) 膽固
煙曲霉 木糖
小平菇（秀珍菇） D-木酮糖
樟疫霉 D-(+)-木糖
草酸青霉 烏來糖
枯草芽胞桿 加拿大樹膠
堿土氣微 阿伯樹膠粉
地生翅孢殼 D(+)-阿伯糖
假單胞 L-阿伯糖
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