以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹:
公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
1)準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲(chǔ)存。
二.細(xì)胞處理:
1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細(xì)胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
商品介紹:
GK921是轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2(TGase2)抑制劑,對(duì)人類(lèi)重組TGase2的IC50值為7.71μM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號(hào):1025015-40-0 純度:98.81% 分子量:344.41 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無(wú)菌去離子水)。
2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞,500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
對(duì)于貼壁細(xì)胞,要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞,胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí),加入細(xì)胞培養(yǎng)液,將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái),轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細(xì)胞。
3) 收集細(xì)胞后,加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細(xì)胞,共洗滌兩次。
4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細(xì)胞,使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細(xì)胞懸液(細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測(cè)
1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè):
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)(1小時(shí)內(nèi)檢測(cè))。
建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組,正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門(mén)的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析,繪制雙色散點(diǎn)圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo),PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí),活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光,早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光,晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>
2) 熒光顯微鏡檢測(cè):
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞,細(xì)胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
pOJ260環(huán)核苷陽(yáng)離子通道蛋白α2抗原Anti-CDK5 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移15(NAT15)
藍(lán)微褐鏈霉菌C型鈉尿肽抗原Anti-CDK5RAP3 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移14(NAT14)
灰黃青霉睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子抗原Anti-CDK6 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移10(NAT10)
費(fèi)氏中華根瘤菌5抗體Anti-CDK8 AntibodyN-乙酰轉(zhuǎn)移1(NAT1)
高山被孢霉抗Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)Anti-CDK9 AntibodyN-乙酰神經(jīng)酰合(NANS)
曲霉Ⅲ型膠原抗原(Collagen Ⅲ Ⅲ型膠原)Anti-CDKL1 AntibodyN-乙酰葡糖激(NAGK)
釀酒酵母IV型膠原(Collagen Ⅳ Ⅳ 型膠原)Anti-CDKL2 AntibodyN-乙酰硫酯(GAS)
聚生殼菌I型膠原蛋白Anti-CDKL4 AntibodyN-乙酰谷合(NAGS)
新城疫病Ⅴ型膠原(多肽)Anti-CDKL3 AntibodyN-乙酰β-D-基葡萄糖苷(NAGase)
細(xì)鏈格孢緊密連接蛋白1抗原Anti-CDKN1C AntibodyN-乙酰α-D-基葡萄糖苷(NAGLU)
pME6032少突膠質(zhì)跨膜蛋白抗原Anti-CDKN2B AntibodyN-酰基乙酰化(NAAA)
死亡谷芽孢桿菌緊密連接蛋白1抗原(C端)Anti-CDKN1B AntibodyN-酰基鞘酰水解2(ASAH2)
異配囊接霉前列腺氧化環(huán)化1抗原Anti-CDKN2C AntibodyN-酰基鞘酰水解1(ASAH1)
嗜果刀孢肉堿棕櫚酰基轉(zhuǎn)移1A多肽抗原Anti-CDKN3 AntibodyN-肉豆蔻酰基轉(zhuǎn)移2(NMT2)
扣囊復(fù)膜孢酵母二氫嘧啶樣2CRMP2抗原Anti-CDX2 AntibodyN-肉豆蔻酰基轉(zhuǎn)移1(NMT1)
巨大芽孢桿菌降鈣受體樣蛋白抗原Anti-CDNF AntibodyN-去乙酰化/磺基轉(zhuǎn)移4(NDST4)
含脯突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體地衣芽孢桿菌人甲狀腺乳頭狀癌細(xì)胞
外周蛋白2抗體嗜熱鏈球菌小鼠血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞
轉(zhuǎn)錄因子Pax6抗體費(fèi)氏志賀氏菌(福氏志賀氏菌)新生牛鼻甲細(xì)胞
PUM1蛋白抗體Hyphomonasadhaerens人惡性霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞,
轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶2(TGase2)抑制劑(GK921)圓酵毛殼 Isosalvipuberulin
香菇 Isonormangostin
蕈狀芽孢桿 Isomurralonginol acetate
細(xì)交鏈孢 Isomagnolone
無(wú) Isodorsmanin A
熱噬淀粉芽孢桿 Isocarapanaubine
紅色紅曲霉 Isobonducellin
淺被黑蛋巢 Icariside I hydrate
大豆慢生根瘤 山香二烯酸
白腐 Honyucitrin
谷棒桿 Heliangin
大腸埃希氏桿 Griffipavixanthone
釀酒酵母 Gelomulide A
枯草芽孢桿 Gardenine
頭狀鏈霉 藤黃占噸酮 E