Wnt/β-catenin通路抑制劑(PNU-74654)公司正在出售的產(chǎn)品：phospho-IRS1(Ser1101)/FITC 熒光標(biāo)記化胰島受體底物-1抗體IgG3-氧烯酯 95%
phospho-IRS1(Ser302) /FITC 熒光標(biāo)記化胰島受體底物-1抗體IgG酰酯 GR，99.5%
phospho-IRS1(Ser332/336)/FITC 熒光標(biāo)記化胰島受體底物-1

以下是細(xì)胞生物學(xué)試劑的詳細(xì)介紹：

商品介紹：

公司產(chǎn)品僅用于科研細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

操作步驟：

1. 樣品染色

1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無(wú)菌去離子水）。

2) 對(duì)于懸浮細(xì)胞，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

對(duì)于貼壁細(xì)胞，要用不含EDTA的胰酶消化細(xì)胞，胰酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細(xì)胞吹打下來(lái)時(shí)，加入細(xì)胞培養(yǎng)液，將細(xì)胞輕輕吹打下來(lái)，轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，500-1000g離心5min收集細(xì)胞。

3) 收集細(xì)胞后，加入預(yù)冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細(xì)胞，共洗滌兩次。

4) 在細(xì)胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細(xì)胞，使細(xì)胞濃度達(dá)到1×106 cell/ml。

5) 吸取100μl細(xì)胞懸液（細(xì)胞總數(shù)為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。

2. 樣品檢測(cè)

1) 流式細(xì)胞儀檢測(cè)：

染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)（1小時(shí)內(nèi)檢測(cè)）。

建議設(shè)置經(jīng)凋亡誘導(dǎo)的正常細(xì)胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個(gè)對(duì)照組，正常細(xì)胞組可作為熒光補(bǔ)償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設(shè)定十字門的位置。結(jié)果可用CellQuest等軟件進(jìn)行分析，繪制雙色散點(diǎn)圖（two-color dot plot），F(xiàn)ITC為橫坐標(biāo)，PI為縱坐標(biāo)。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時(shí)，活細(xì)胞僅有很低強(qiáng)度的背景熒光，早期凋亡細(xì)胞僅有較強(qiáng)的綠色熒光，晚期凋亡細(xì)胞有綠色和紅色雙重?zé)晒狻?/span>

2) 熒光顯微鏡檢測(cè)：

染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍(lán)光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結(jié)合的細(xì)胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細(xì)胞膜完整性的細(xì)胞，細(xì)胞核顯示紅色，膜上有綠色光環(huán)。
香菇大鼠白介15Anti-SLC16A3 Antibody人低分子肝(LMWH)

假單胞菌人β乳糖蛋白抗體IgGAnti-SLC18A3 Antibody人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)

大毛霉大鼠白介16Anti-SLC22A18 Antibody人補(bǔ)體3裂解產(chǎn)物(C3SP)

網(wǎng)孢麻孢菌小鼠淋巴功能相關(guān)抗原3Anti-SLC22A6 Antibody人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)

橙蓋傘人抗肌內(nèi)膜抗體IgAAnti-SLC22A18 Antibody人補(bǔ)體片段3b受體(C3bR)

中國(guó)油脂酵母小鼠可溶性血小板內(nèi)皮粘附分子1Anti-SLC24A1 Antibody人補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)

釀酒酵母大鼠白介17Anti-SLC24A3 Antibody人補(bǔ)體1抑制物抗體(C1INH)

淡紫擬青霉人抗糖蛋白抗體Anti-SLC24A4 Antibody人B因子(BF)

葡萄座腔菌大鼠白介1可溶性受體ⅠAnti-SLC24A4 Antibody人B因子(BF)

卵孢白僵菌小鼠骨成型蛋白7Anti-SLC25A21 Antibody人類白抗原G(HLA-G)

金黃色葡萄球菌金黃亞種人抗單核抗體Anti-SLC25A11 Antibody人類白抗原G(HLA-G)

真姬菇人氧化低密度脂蛋白抗體Anti-SLC25A31 Antibody人補(bǔ)體片斷3b(C3b)

阿坎特港富鹽菌大鼠可溶性E選擇Anti-SLC25A12 Antibody人補(bǔ)體片斷3b(C3b)

枯草芽胞桿菌小鼠透明質(zhì)Anti-SLC25A27 Antibody人補(bǔ)體片斷4b(C4b)

地衣芽胞桿菌（未復(fù)核可換ACCC06149）大鼠白介1可溶性受體ⅡAnti-SLC25A6 Antibody人補(bǔ)體片斷4b(C4b)

放射形根瘤菌小鼠胰高血糖樣肽1Anti-SLC27A4 Antibody人補(bǔ)體片斷5b(C5b)

四分子交聯(lián)體14抗體四旋蛋白#煙草節(jié)桿菌5-PeS1(2-D8)

酪蛋白硫轉(zhuǎn)移2抗體*槐耳A375sci

睪丸特異絲/蘇激6抗體堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌hTSC29

tRNA剪接內(nèi)切2抗體核果褐腐病菌hT279
Wnt/β-catenin通路抑制劑(PNU-74654)凍干粉  大腸埃希氏（定量）  OXi4503

澳型核果褐腐病 L-蛋（甲硫)

食酸 Milataxel

強(qiáng)酒海桿狀 Larotaxel

葡萄炭疽盤孢 多聚右旋賴

類芽胞桿 Karenitecin

德氏乳桿乳亞種 多聚右旋賴

射鱗蘑菇(暫定名) 多聚右旋賴

靈芝(紅芝, 赤芝) DRF-1042

少根根霉原變種 多聚賴

Roseomonas 多聚賴

芽胞桿 DHA-paclitaxel

解脂亞羅酵母 Dapagliflozin

枯草芽孢桿 Celgosivir

小單孢 多聚賴