詳細介紹
商品介紹:
用途: 培養(yǎng)細胞和組織切片的衰老檢測,又稱X-gal染色液 注意事項: 試劑盒主要由β-半乳糖苷酶固定液、X-gal、半乳糖苷酶染色液等組成。以X-Gal為底物,在衰老特異性的β-半乳糖苷酶催化下會生成深藍色產(chǎn)物。 儲存條件:-20℃,避光,12個月 |
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
100T | 1~3天 |
操作步驟:
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer(10×)稀釋成1×Binding buffer工作液備用(1ml Binding Buffer(10×)需加入9ml無菌去離子水)。
2) 對于懸浮細胞,500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞,要用不含EDTA的胰酶消化細胞,胰酶消化時間不宜過長或過短,最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時,加入細胞培養(yǎng)液,將細胞輕輕吹打下來,轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi),500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后,加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌,離心收集細胞,共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液,重懸細胞,使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液(細胞總數(shù)為1×105 cell)至一新管中,加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI,輕輕混勻,室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測:
染色孵育后,每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液,混勻后使用流式細胞儀檢測(1小時內(nèi)檢測)。
建議設置經(jīng)凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組,正常細胞組可作為熒光補償調(diào)節(jié)去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析,繪制雙色散點圖(two-color dot plot),F(xiàn)ITC為橫坐標,PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯(lián)合使用時,活細胞僅有很低強度的背景熒光,早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光,晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測:
染色孵育后涂片,顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環(huán)。喪失細胞膜完整性的細胞,細胞核顯示紅色,膜上有綠色光環(huán)。
公司產(chǎn)品僅用于科研細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
磺雙氫麥角堿(標準品)英文名稱: 21-Acetoxypregnenolone相似腫瘤抑制基因HUGL抗體包裝1g
基多巴(標準品)英文名稱: phelloptorin白介1β抗體包裝25g
基黃連堿(標準品)英文名稱: Ellagic acidβ-乳球蛋白抗體包裝5g
基蓮心堿(標準品)英文名稱: D-Tetrahydropalmatine脂質(zhì)磷磷相關蛋白1/可塑性相關基因3抗體包裝100g
基麥冬二氫高異黃A,基麥冬黃烷A英文名稱: 4-Bromobenzylamine神經(jīng)突觸粘附樣分子1抗體包裝25g
基麥冬黃A(標準品)英文名稱: Ganoderenic acid B富含亮重復家庭蛋白1抗體包裝500g
基麥冬黃烷B英文名稱: Tetrahydropalmatine富含亮重復家庭蛋白4抗體包裝1g
溴東莨菪堿(標準品)英文名稱: Tetrahydropalmatine瘦受體抗體(長)包裝5g
假人參皂苷RT1英文名稱: Pregnenolone Acetate白血病抑制因子抗體包裝1g
見血飛(標準品)英文名稱: Pregnenolone AcetateNogo受體反應蛋白抗體包裝25g
劍麻皂苷元(標準品)英文名稱: Chitosan凋亡抑制蛋白抗體包裝5g
箭根薯(標準品)英文名稱: Chitosan層粘連蛋白抗體包裝100g
江南卷柏(標準品)英文名稱: AllicinLpin1 抗體包裝25g
江藤苷英文名稱: α-CyperoneLpin1 抗體包裝5g
姜黃(標準品)英文名稱: Cefaclor溶菌抗體包裝1g
暗棕色桿菌Phaeobacter│sp. 質(zhì)量規(guī)格:含量≥99%抗軟骨抗體試劑盒肥皂草;Saponin
傳染性支氣管炎病毒Coronavirus│Infectious bronchitis virus 質(zhì)量規(guī)格:含量≥98.0%抗狀瘤病17型試劑盒法卡林二;Falcarindiol
曲霉屬Aspergillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR抗絨毛膜促性腺激抗體試劑盒蜂斗菜內(nèi)酯A;Bakkenolide A
β-半乳糖苷酶染色試劑盒(細胞專用)黑木耳 4'-氟苯酮二乙烯原葉綠酸酯Elisa
黑曲霉 3,4-二氟油菜類固Elisa
地下節(jié)桿 間氟木葡聚糖內(nèi)糖基轉(zhuǎn)水解Elisa
解淀粉芽孢桿 3-溴-4-氯三氟甲苯維生KElisa
枯草芽孢桿 1-異基咪唑Flag標簽Elisa
3-氟-4-甲苯異分支酸合Elisa
小鏈霉 2,4-二氟甲苯異分支酸裂解Elisa
繩生毛殼 2-氟-4-氯甲苯葉綠降解過氧化物Elisa
釀酒酵母 2-氯-4-氟甲苯脂肪酸分解Elisa
黑木耳(186) 4-氟-2-酚甲基轉(zhuǎn)移1Elisa
巨大芽孢桿 4-氟-3-酚磷脂酸磷酸酯Elisa
Candida 2,5-二氟甲苯羥化Elisa
變平滑假絲酵母 2-溴-5-氟甲苯異分支酸合成Elisa
柴油食烷 4-(4-甲氧基苯基)丁酸異分支酸裂解Elisa
Enterobacter cowanii Inoue et al. 2,3-二氟絲氨酸蛋白抑制劑Elisa