公司產(chǎn)品僅用于科研
細胞生物學(xué)研究有以下幾個方面:
細胞生物學(xué)的研究內(nèi)容十分廣泛,主要包括:
①細胞核、染色體以及基因表達的研究;
②生物膜與細胞器的研究;
③細胞骨架體系的研究;
④細胞增殖及其調(diào)控;
⑤細胞分化及其調(diào)控;
⑥細胞的衰老與編程性死亡(凋亡);
⑦細胞的起源與進化;
⑧細胞工程.
產(chǎn)品屬性:
中文名稱:AGC kinase抑制劑(AT13148)
英文名稱:AT13148
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
發(fā)貨周期:1~3天
商品介紹:
AT13148是一種可,ATP競爭性的AGC kinase的抑制劑,能夠抑制Akt1/Akt2/Akt3,p70S6K,PKA和ROCKI/ROCKII的活性,IC50值分別為38nM/402nM/50nM,8nM,3nM和6nM/4nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! CAS號:1056901-62-2 純度:99.46% 分子量:313.78 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大小;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
腸沙門氏菌腸炎亞種人降鈣原Anti-TPD52L2 Antibody人顆粒溶(GNLY)
Gillisia sp.大鼠血管內(nèi)皮生長因子Anti-TPD52L1 Antibody人富組蛋白(HTN5)
酒香酵母大鼠腫瘤壞死因子αAnti-TP53INP2 Antibody人富組蛋白(HTN5)
米根霉人反狀腺原Anti-TPRA1 Antibody人免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)
大斑凸臍蠕孢人6前列腺F1aAnti-TPT1 Antibody人免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄體受體(ILTsR/LIR/CD85)
枯草芽孢桿菌枯草亞種大鼠轉(zhuǎn)化生長因子β1Anti-TPSD1 Antibody人絲狀血球凝集(FHA)
葡萄座腔菌人戊糖Anti-TPX2 Antibody人絲狀血球凝集(FHA)
短小芽孢桿菌大鼠干因子/肥大生長因子Anti-TPRA1 Antibody人絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)
菊池鏈格孢大鼠煙酰腺二核苷磷Anti-TRAF3IP1 Antibody人絨毛蛋白/埃茲蛋白(CVL)
鏈球菌(不定種)人變腎上腺Anti-TRAF3IP2 Antibody人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)
大腸埃希氏桿菌人多巴D1受體Anti-TRADD Antibody人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)A(CyPA)
蠟樣芽孢桿菌大鼠血小板衍生生長因子ABAnti-TRA2A Antibody人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)
羅倫隱球酵母羅倫變種人腎上腺能a1A受體Anti-TRA2A Antibody人肌養(yǎng)蛋白(dystrophin)
谷棒桿菌大鼠血小板衍生生長因子可溶性受體αAnti-TRADD Antibody人膠原凝集(Collectin)
癭青霉大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子4Anti-TRAF3IP2 Antibody人膠原凝集(Collectin)
釀酒酵母人早老2Anti-TRAPPC1 Antibody人伴侶蛋白10(CPN10)
泛結(jié)合E2J1抗體麥角1B12株
泛結(jié)合UFC1抗體*大白樁菇人類T細胞雜交瘤細胞
泛蛋白連接E2I抗體黑平185鼠/人7系
泛蛋白連接D2抗體槐栓菌抗人SH3-結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白單抗7
AGC kinase抑制劑(AT13148)光帽鱗傘 去甲氧基醉椒
腸桿屬 去氫駱駝蓬堿
明尼蘇達被毛孢 曲克蘆丁
嗜熱鏈球 DL-谷氨酰
暗孢節(jié)菱孢 L-谷單鈉鹽
巴氏芽孢桿 L-谷鹽酸鹽
大腸埃希 DL-谷
短芽孢桿 D-谷
枯草芽孢桿 L-谷
球孢白僵 L-胱鹽酸鹽
枯草芽胞桿 氫高烏甲
膠孢 DL-胱
黃桿 L-胱
新日本靈芝 羥基檸檬酸
燼灰鏈霉 L-半胱鹽酸鹽無水物