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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
GNE-477 | 1mL(10mM)|1mg|5mg | 1～3天 |
商品介紹：
GNE-477是一個高效雙重PI3K/mTOR抑制劑，對PI3K的IC50值為4nM,對mTOR的Kiapp值為21nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：1032754-81-6 純度：98.45% 分子量：504.63 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
異常漢遜酵母Bacillus cereus
丁香直絲鏈霉菌Bacillus cereus
細交鏈孢菌Bacillus cereus
沃氏富鹽菌Bacillus cereus
南海棲砂桿菌Bacillus cereus
黃傘Bacillus cereus
枯草芽孢桿菌Bacillus cereus
榮州假黃單胞菌Bacillus cereus
枯草芽孢桿菌Bacillus cereus
臭黃菇Bacillus cereus
靈芝Bacillus cereus
地衣芽孢桿菌Bacillus cereus
Deinococcus xibeiensis Wang et al. Bacillus cereus
TA102 鼠傷寒沙門氏菌Bacillus cereus
薄花邊傘Bacillus cereus
類芽孢桿菌屬Bacillus mycoides
豬維生D(VD)免疫試劑盒α/β水解4抗體人巨噬替代激活相關化學因子1(AmAC-1)蝙蝠葛諾林堿
豬褪黑(MT)免疫試劑盒ADCK2蛋白抗體人巨噬替代激活相關化學因子1(AmAC-1)蝙蝠葛苷
豬透明質(HA)免疫試劑盒乙脫氫16家庭A1抗體人可溶性血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)蝙蝠葛蘇林堿
豬鐵蛋白(FE)免疫試劑盒粘附分子IgG樣結構域蛋白3抗體人可溶性血管內皮生長因子受體2(VEGFR-2/sFLK-1)蝙蝠葛新諾林堿
雙重PI3K/mTOR抑制劑(GNE-477)Selenoprotein W 英文名稱： 硒蛋白W抗體 0.1ml
ECHDC2 英文名稱： 烯酰水合酶含結構域蛋白2抗體 0.2ml
硒蛋白W抗體 Anti-Selenoprotein W 0.1ml
Anti-phospho-Tau protein (Ser422)/FITC 熒光素標記磷酸化微管相關蛋白抗體IgGMulti-class antibodies規格： 0.2ml
Rhesus antibody Rh phospho-MEF2C(Ser59) 磷酸化肌細胞增強因子2C抗體 規格 0.1ml
AQP5(aquaporin Protein-5) 水通道蛋白-5抗原Multi-class antibodies規格： 0.5mg
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