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詳細介紹
以下是細胞生物學試劑的詳細介紹：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 發貨周期 |
Purvalanol B | 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg | 1～3天 |
商品介紹：
Purvalanol B(NG-95)是CDK抑制劑，對cdc2/cyclin B，cdk2/cyclin A，cdk2/cyclin E，cdk4/cyclin D1和cdk5-p35的IC50分別為6，6，9，>10000和6nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ CAS號：212844-54-7 別名：NG 95 純度：96.90% 分子量：432.9 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
公司產品僅用于科研細胞培養操作規程：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640：GIBCO)，90%；優質胎牛血清，10%。
2）培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現用現配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
操作步驟：
1. 樣品染色
1) 將Binding Buffer（10×）稀釋成1×Binding buffer工作液備用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml無菌去離子水）。
2) 對于懸浮細胞，500-1000g離心5min收集細胞。
對于貼壁細胞，要用不含EDTA的胰酶消化細胞，胰酶消化時間不宜過長或過短，最好是在輕輕吹打可以使貼壁細胞吹打下來時，加入細胞培養液，將細胞輕輕吹打下來，轉移到離心管內，500-1000g離心5min收集細胞。
3) 收集細胞后，加入預冷PBS溶液輕搖或用移液器輕柔吹打洗滌，離心收集細胞，共洗滌兩次。
4) 在細胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重懸細胞，使細胞濃度達到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl細胞懸液（細胞總數為1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，輕輕混勻，室溫避光孵育15min。
2. 樣品檢測
1) 流式細胞儀檢測：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混勻后使用流式細胞儀檢測（1小時內檢測）。
建議設置經凋亡誘導的正常細胞、PI單染和Annexin V-FITC單染3個對照組，正常細胞組可作為熒光補償調節去除光譜重疊和設定十字門的位置。結果可用CellQuest等軟件進行分析，繪制雙色散點圖（two-color dot plot），FITC為橫坐標，PI為縱坐標。Annexin V-FITC和PI聯合使用時，活細胞僅有很低強度的背景熒光，早期凋亡細胞僅有較強的綠色熒光，晚期凋亡細胞有綠色和紅色雙重熒光。
2) 熒光顯微鏡檢測：
染色孵育后涂片，顯微鏡下觀察。使用熒光顯微鏡上的藍光和綠光通道分別觀察FITC和PI。被Annexin V-FITC結合的細胞顯示漿膜上有綠色光環。喪失細胞膜完整性的細胞，細胞核顯示紅色，膜上有綠色光環。
大禿馬勃*人大內皮Anti-UNG Antibody人淀粉樣前體蛋白(βAPP)
繩狀籃狀菌人全段甲狀旁腺Anti-URB1 Antibody人β2糖蛋白(β2-GP)
長裙竹蓀人降鈣Anti-URI1 Antibody人β2糖蛋白(β2-GP)
嗜熱脂肪地芽孢桿菌人促甲狀腺Anti-Urocortin Antibody人α乳清蛋白(α-La)
雜色曲霉原變種人皮質Anti-USO1 Antibody人α乳清蛋白(α-La)
米曲霉人唾液皮質Anti-USF2 Antibody人N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯(AcSDKP)
野土地桿菌人雌二Anti-USP11 Antibody人N-乙酰基-絲酰-天門冬酰-賴酰-脯(AcSDKP)
中瀨擲孢酵母人脫氫表雄硫酯Anti-USP13 Antibody人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)
金黃殼囊孢菌人睪Anti-USP19 Antibody人乳鐵傳遞蛋白/乳鐵蛋白(LF/LTF)
谷棒桿菌人游離睪Anti-USP18 Antibody人腦紅蛋白(NGB)
大團囊蟲草人雄烯二Anti-USP19 Antibody人腦紅蛋白(NGB)
蕈狀芽孢桿菌人雌三Anti-USP30 Antibody人的牛血清白蛋白殘留檢測
扣囊復膜孢酵母人17羥孕Anti-USP30 Antibody人的牛血清白蛋白殘留檢測
皺曲毛殼人狀腺原Anti-USP24 Antibody人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)
食木薯乳桿菌人甲狀腺Anti-USP36 Antibody人β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)
柱狀田頭菇（茶樹菇、楊樹菇）人游離甲狀腺Anti-USP32 Antibody人髓磷脂堿性蛋白(MBP)
泛特異性蛋白28抗體梭孢環柄菇正常細胞
二磷葡萄糖神經酰胺葡萄糖基轉移2抗體土黃錐蓋菇豚鼠皮膚細胞
泛相關蛋白1抗體鼻咽癌相關基因20蛋白亞灰光柄菇發綠色熒光的小鼠胚胎干細胞
廣泛表達轉錄蛋白UXT抗體黑紫紅菇小鼠紅白血病細胞
CDK抑制劑（Purvalanol B）澳型核果褐腐病 4-氨基-3-肼基-5-巰基-1,2,4-三氮唑
甜芝 沒食子酸甲酯
肺炎克雷伯氏 4-芐基氨基-7-并氧雜惡二唑
焦曲霉 漏蘆甾酮
米根霉 1,2-茚滿二酮
迪茨氏屬 3,3'5,5'-四甲基聯苯磺酸鈉
蘇云金芽孢桿 律草酮
肉梭 C型 龍膽酸
亞粘團串珠鐮孢 N-乙基-N-(3-磺基)-3-甲氧基苯鈉鹽
新月彎孢 藜蘆
東方醋桿 β-萘紫
禽網狀內皮組織增生病病 硫磺S
黃曲霉 天竺葵（化花葵）
蒼黃瘡痂鏈霉 硫黃T
枯草芽孢桿 藍萼甲
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