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過碘酸雪夫反應(PAS)——顯示細胞內糖原資料說明

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(一)原理

組織、細胞的多糖、粘多糖及粘蛋白等都可用PAS法來顯示,其化學基礎是利用過碘酸的氧化作用,打開碳鏈形成醛,生成的醛基與Schiff試劑中的無色品紅反應形成紫紅色化合物。

(二)方法

l.取l~2mm厚的肝組織塊,用Carnoy氏液4℃固定4~6小時。

2.乙醇脫水、二甲苯透明。石蠟包埋,切片。

3.用70%乙醇展片。

4.脫蠟:二甲苯(1)5分鐘→二甲苯(2)5分鐘→100%乙醇5分鐘→含1%火棉膠的乙醇液1分鐘→70%乙醇1分鐘。

5.直接浸入過碘酸酒精液反應5~15分鐘,經70%乙醇洗片刻。

6.浸入Schiff氏酒精液反應15分鐘。

7.亞硫酸水洗三次,以洗去多余的非特異性結合的色素,以及擴散的染料。

8.流水沖洗3~5分鐘。

9.蒸餾水洗。

10.浸入Ehrlich蘇木精復染20~30秒,使細胞核著色。

11.脫水:95%乙醇3分鐘二次→100%乙醇3分鐘二次→二甲苯透明10分鐘二次。

12.加蓋片鏡檢或樹膠封固后鏡檢。 

(三)結果

細胞中呈紫紅的顆粒即為糖原。

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