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干粉細胞培養基的配制方式及注意事項
閱讀：5396 發布時間：2017-5-18在干細胞培養基配制過程中，不同的培養基其溶解性可能有一定的差別，培養基配制過程中血清、碳酸氫鈉及抗生素等的添加時間和用量、pH和滲透壓的測定及酸堿度是否需要調節等，都可能影響zui終細胞培養基性能的發揮。
（1）配制常規過濾除菌粉末細胞培養基
1) 配制用水：通常選擇制備的超純水器過濾出的去熱原（細菌內毒素<0.25EU/m）培養基用水（TOC< 10μg/L或者是10mg/L，電阻率：18.2MΩ（25℃））。現用現制備，隔夜儲存用水（非無菌）的細菌內毒素及電導率等升高，影響細胞的增殖和產品的質量；
2) 培養基粉劑的稱量：小量采用天平稱量，要求準確；大量采用市售大包裝，配制時可以根據說明；
3) 干細胞粉劑溶解：溶解充分，觀察有無顆粒，顏色改變情況等；
4) 過濾前約半個小時（根據配制量可調）按使用說明添加NaHCO3，充分溶解；
5) 測定pH，根據需要用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液來調節pH。過濾后的pH將會有所增長；
6) 定容，檢測滲透壓；
7) 盡快過濾、分裝，封好瓶口，避免漏氣，2~8℃保存；
8) 采用一次性濾器時濾后檢查濾膜，有無漏、裂、是否很臟或是有未溶解物；采用不銹鋼濾器（內置可反復用的除菌濾芯）需進行濾器的完成性檢測；
9) 過濾前、中、后三段采樣進行無菌檢測，同時，留取樣品置于37℃培養，至該批培養基用完；
10) 完整記錄整個過程每一個步驟，便于追溯。
（2）配制可高壓滅菌粉末細胞培養基
1) 其配制用水及配制粉劑的稱取、及配制程序基本同過濾型培養基配制方法。溶解后高壓，通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。
2) 待細胞培養液冷卻至室溫，按一定比例加入無菌的谷氨酰胺溶液、無菌7.5％（w/v）碳酸氫鈉溶液，加注射用水（水溫20℃～30℃）至規定體積，混勻。
3) 如果必要，用1mol / L 氫氧化鈉溶液或 1mol /L鹽酸溶液調pH至所需值。
4) 干細胞溶液應在2℃－8℃下避光保存。