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SCFA ELISA檢測試劑盒操作方法（裸鼠）
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被裸鼠短鏈脂肪酸（SCFA）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的裸鼠短鏈脂肪酸（SCFA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
操作步驟
- 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
- 設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
- 樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
- 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
- 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
試劑盒性能
- 檢測范圍：20 μmol/L – 640 μmol/L。
- 靈敏度：低檢測濃度小于1.0 μmol/L。
- 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。
- 重復性：板內變異系數小于10% ，板間變異系數小于15% 。
