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NAD激酶(NADK)測試盒微量法

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    上海市

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100管/48樣660元15 盒 可售
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更新時間:2025-03-05 12:22:39瀏覽次數(shù):572

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產(chǎn)品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 100管/48樣
貨號 GOY-SH121 應(yīng)用領(lǐng)域 生物產(chǎn)業(yè)
主要用途 僅供科研研究實驗 檢測方法 微量法
產(chǎn)品類別 輔酶Ⅰ系列 品牌 谷研
貨期 現(xiàn)貨    
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詳細(xì)介紹

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

NAD激酶(NADK)測試盒微量法

規(guī)格

100管/48樣

檢測方法

微量法

貨號

GOY-SH121

產(chǎn)品分類

輔酶Ⅰ系列

用途

僅供科研實驗

NAD激酶(NADK)測試盒微量法

測定意義:

NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無機多聚磷酸[poly(P)]作為磷酰基供體進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。
測定原理:
NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過在600 nm下測定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。
需自備的儀器和用品:
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 10 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 25 mL×1 瓶,4℃保存;

試劑三:粉劑×1 瓶,-20 ℃保存;

試劑四:粉劑×1 瓶,-20℃保存;

組織樣本的前處理:

1、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備:

細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量

(104個):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,

加入 1mL 提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。

2、血清(漿)樣品:直接檢測。

測定步驟:

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 340nm,蒸餾水調(diào)零。

2、將試劑一和試劑二 37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 15min 以上。

3、工作液Ⅰ的配制:在試劑三中加入 5mL 試劑一,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

 工作液Ⅱ的配制:在試劑四中加入 18mL 試劑二,充分混勻待用;用不完的試劑分裝后

-20℃保存,禁止反復(fù)凍融;

4、加樣表

試劑名稱(μL) 測定孔 對照管

樣本 20 20

工作液Ⅰ 80

試劑一 80

充分混勻,37℃(哺乳動物)或 25℃(其它物種)水浴 15min,立即煮沸2min(蓋緊,防止水分散失)冰浴冷卻,10000g,25℃離心 10min,取上清

上清液 40 40

工作液Ⅱ 160 160

加完試劑混勻,室溫靜置 15min,340nm 下測定吸光值,ΔA=A 測定-A 對照。

NADK 活性計算:

a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清(漿)NADK 活力的計算:

單位的定義:每 mL 血清(漿)每分鐘生成 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=53.59×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADK 活力的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=53.59×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=53.59×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min /104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.107×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-4

L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103L / mol /cm;d:

比色皿光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.02 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:

反應(yīng)時間,15 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞

總數(shù),500 萬。

b.用 96 孔板測定的計算公式如下

1、血清(漿)NADK 活力的計算:

單位的定義:每 mL 血清(漿)每分鐘生成 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷V 樣÷T=107.18×ΔA

2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中 NADK 活力的計算:

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每 mg 組織蛋白每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min /mg prot)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=107.18×ΔA÷Cpr

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每 g 組織每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min /g 鮮重)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T=107.18×ΔA÷W

(3)按細(xì)菌或細(xì)胞密度計算:

單位的定義:每 1 萬個細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘生成 1 nmol NADP 定義為一個酶活力單位。

NADK(nmol/min /104cell)=[ΔA×V 反總÷(ε×d)×109]÷(500×V 樣÷V 樣總) ÷T=0.214×ΔA

V 反總:反應(yīng)體系總體積,1×10-4

L;ε:NADPH 摩爾消光系數(shù),6.22×103

L / mol /cm;d:

96 孔板光徑,1cm;V 樣:加入樣本體積,0.02 mL;V 樣總:加入提取液體積,1 mL;T:

反應(yīng)時間,15 min;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)菌或細(xì)胞

總數(shù),500 萬。

生化檢測試劑盒實驗操作說明:

一、抗氧化系列生化檢測試劑盒

包括氧化酶(XO)活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性(GOD)檢測、總抗氧化能力(TAC)檢測、植物原花青素(OPC)含量檢測、植物類黃酮含量檢測、植物總酚(TP)含量檢測試劑盒。

氧化酶(XO)活性分析試劑盒為例,提供了一種簡單易用的比色分析法,用于測定各種樣品中的XO活性,特點是測定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性,以及廣泛的檢測范圍:15.6 -500 mU/mL

二、氧化系列生化檢測試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫(H2O2)檢測、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測、超氧陰離子含量檢測等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測試劑盒(比色法)為例,提供了一種簡單易用的比色法,用于分析不同生物樣品(細(xì)胞/組織裂解液,生物液體)中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點是:1.測定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。2.樣本處理、實驗步驟以及結(jié)果計算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長。

NAD激酶(NADK)測試盒微量法 

 

三、抗逆系列生化檢測試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶(PPO)活性檢測、過氧化物酶(POD)活性檢測等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測試劑盒為例,提供一種簡單易用的比色測定法,用于定量測定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點是:1.測定血清,血漿,組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測定SOD活性,zui大抑制率可接近100%,不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測范圍:3.13- 200U/mL

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