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正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

商品屬性：

測(cè)定意義：

THL（EC 3.2.1.28）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。海藻糖酶主要功能在于生物體分解海藻糖生成葡萄糖而直接用于能量供應(yīng)。
測(cè)定原理：
采用3.5－二硝基水楊酸法測(cè)定THL催化海藻糖產(chǎn)生的還原糖的含量。還原糖與3.5－二硝基水楊酸共熱生成棕紅色的氨基化合物，在一定范圍內(nèi)還原糖的量和反應(yīng)液的顏色深度成正比，由此判斷THL活性的高低。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

提取液二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：液體 14μL×1 支，4℃保存；

組織樣本的前處理：

①總 GAPDH 酶提?。航ㄗh稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一，冰浴勻漿后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時(shí)間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測(cè)定。

②胞漿和葉綠體 GAPDH 酶的分離：按照植物組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5～10的比例（建議稱取約 0.1g 樣本，加入 1mL 提取液一），冰浴勻漿后于 4℃，200g 離心 5min，棄沉淀，取上清在4℃，8000g 離心 10min，取上清用于測(cè)定胞漿 GAPDH 酶活性，取沉淀加 1mL 提取液二，震蕩溶解后超聲破碎（冰浴，200W，破碎 3s，間歇 7s，總時(shí)間 1min），然后 4℃，8000g 離心 10min，取上清測(cè)定葉綠體中 GAPDH 酶活性。

建議測(cè)定總 GAPDH 酶活性，按照步驟①提取粗酶液，若需要分別測(cè)定胞漿和葉綠體中的GAPDH，則按照步驟②提取粗酶液。細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞的前處理先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：提取液一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 提取液一），超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3s，間隔 10s，重復(fù) 30 次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、 樣本測(cè)定

（1）工作液的配制：將試劑二全部倒入試劑一瓶中，充分溶解，37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)預(yù)熱 10 分鐘；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（2）在試劑三中加入 500μL 蒸餾水，充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

（3）在 1mL 石英比色皿中加入 30μL 樣本、20μL 試劑三和 950μL 工作液，混勻，加入最后一個(gè)試劑的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，記錄 340nm 處 20s 時(shí)的吸光值 A1 和 5min20s 后的吸光值

A2，計(jì)算 ΔA=A1-A2。

GAPDH 活性計(jì)算

（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(V 樣×Cpr) ÷T=1072×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T=1072×ΔA÷W

（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算

單位的定義：每一萬個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADH 定義為一個(gè)酶活力單位。GAPDH（nmol/min/104cell）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×109]÷(500 ×V 樣÷V 樣總) ÷T=2.144×ΔAV 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10-3L；ε：NADH 摩爾消光系數(shù)，6.22×103L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；500：細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù)，500 萬。

生化檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作說明：

一、抗氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括氧化酶（XO）活性分析、超氧陰離子清除能力分析、葡萄糖氧化酶活性（GOD）檢測(cè)、總抗氧化能力（TAC）檢測(cè)、植物原花青素(OPC)含量檢測(cè)、植物類黃酮含量檢測(cè)、植物總酚（TP）含量檢測(cè)試劑盒。

氧化酶（XO）活性分析試劑盒為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色分析法，用于測(cè)定各種樣品中的XO活性，特點(diǎn)是測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的氧化酶活性，以及廣泛的檢測(cè)范圍：15.6 -500 mU/mL。

二、氧化系列生化檢測(cè)試劑盒

包括過氧化氫酶 (CAT) 活性分析、過氧化氫（H2O2）檢測(cè)、脂質(zhì)過氧化(丙二醛) 分析、蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)、超氧陰離子含量檢測(cè)等試劑盒。

蛋白質(zhì)羰基含量檢測(cè)試劑盒（比色法）為例，提供了一種簡(jiǎn)單易用的比色法，用于分析不同生物樣品（細(xì)胞/組織裂解液，生物液體）中蛋白質(zhì)羰基含量。在370 nm處有特征吸收峰。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定組織樣本、細(xì)胞、細(xì)菌、血清等中的蛋白質(zhì)羰基含量。2.樣本處理、實(shí)驗(yàn)步驟以及結(jié)果計(jì)算更加詳盡準(zhǔn)確精煉。3.保質(zhì)期長(zhǎng)。

三、抗逆系列生化檢測(cè)試劑盒

包括超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)、羥自由基清除能力分析、多酚氧化酶（PPO）活性檢測(cè)、過氧化物酶(POD)活性檢測(cè)等試劑盒。

超氧化物歧化酶 (SOD) 活力檢測(cè)試劑盒為例，提供一種簡(jiǎn)單易用的比色測(cè)定法，用于定量測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解液和其它生物體液中的SOD酶活性。

特點(diǎn)是：1.測(cè)定血清，血漿，組織/細(xì)胞裂解物和其他生物體液中的SOD酶活性。2.通過WST-8法測(cè)定SOD活性，zui大抑制率可接近100％，不受一些常見干擾因素的干擾。3.廣泛的檢測(cè)范圍：3.13- 200U/mL。

公司正在出售的產(chǎn)品：