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詳細(xì)介紹
小泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌使用及效果：
將壓碎的一小片重量約在100 mg 左右的植物種子（約1/4 黃豆大小）或直徑約為0.5-0.7 cm（或面積相當(dāng)?shù)钠渌螤睿┑闹参锶~片直接加到新鮮配制的0.1 mL溶液A 中，95℃保溫10-15 分鐘，加入0.1 mL 溶液B，混勻，直接取上清液（相當(dāng)于PCR 體積的1/10）作為模板進(jìn)行PCR。剩余樣品可以放4℃保存。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 分類(lèi) |
小泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌 | 50T | PCR檢測(cè)試劑盒 |
樣本采集、存放及運(yùn)輸：
1、樣本采集：各類(lèi)型樣本按照常規(guī)方法采集；
2、存放：樣本在2~8℃條件下保存應(yīng)不超過(guò)72h，-70℃以下可長(zhǎng)期保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融（zui多凍融3次）；
3、運(yùn)輸：采用泡沫箱加冰密封進(jìn)行運(yùn)輸。
普通PCR反應(yīng)流程:
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自備物品：
小泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌15毫升錐形離心管：用于制備樣品的容器
比色皿：用于比色的容器
96孔酶標(biāo)板：用于比色的容器
分光光度儀：用于比色分析
酶標(biāo)儀：用于微量樣品比色分析
儲(chǔ)存條件：
14℃或－20℃
準(zhǔn)備物品
清理液（A） 毫升
染色液（t B） 微升
稀釋液（C） 毫升
溶解液（tD） 毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū) 1份
Hep G2(人肝細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
293(人胚腎細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
CHO-K1(倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞亞株)5×106cells/瓶×2
小鼠結(jié)腸平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
769-P(人腎細(xì)胞腺細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
人子宮內(nèi)膜上細(xì)胞*培養(yǎng)基100mL
BLB培養(yǎng)基/BLB Medium雙歧桿菌的分離培養(yǎng)250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
人海馬神經(jīng)元
Hela S3(人宮頸細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
CIN-1I培養(yǎng)基基礎(chǔ)/耶爾森氏菌選擇性瓊脂/孢磺啶苯酚新生霉素瓊脂/CIN Agar分離小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌250克國(guó)產(chǎn)/進(jìn)口
TE671 subline No.2(人橫紋肌肉瘤細(xì)胞)5×106cells/瓶×2
小泰勒蟲(chóng)PCR檢測(cè)試劑盒品牌EEF2 真核翻譯延長(zhǎng)因子2抗體 0.2ml
FIS1/TTC11 線(xiàn)粒體裂變1蛋白抗體 0.2ml
Phospho-Zyxin (Ser142/Ser143) 磷酸化斑聯(lián)蛋白抗體 0.1ml
Phospho-SHP2/SHIP2(Tyr81) 磷酸化蛋白酪氨酸磷酸酶2抗體 0.1ml
Rabbit anti-Monkey IgM whole serum 兔抗猴IgM抗血清 1ml
RASSF1A Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗體 0.1ml
APC70/CRSP70 轉(zhuǎn)錄激活蛋白crsp70抗體 0.2ml
GCET1 B淋巴細(xì)胞生發(fā)中心相關(guān)蛋白抗體 0.2ml
FKSG14/Centromere protein K 著絲粒蛋白K 0.2ml
phospho-CREM (Ser271 +Ser 274) 磷酸化環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件調(diào)節(jié)蛋白抗體 0.1ml
CCDC16/zinc finger protein 830 鋅指蛋白830抗體 0.2ml
phospho-c-Raf(Ser338) 磷酸化原癌基因c-Raf抗體 0.1ml
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物：引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵，PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補(bǔ)的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列， 就能按其設(shè)計(jì)互補(bǔ)的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴(kuò)增。設(shè)計(jì)引物應(yīng)遵循以下原則：
①引物長(zhǎng)度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長(zhǎng)至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過(guò)多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
⑤引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第二個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， 被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫(kù)的其它序列無(wú)明顯同源性。
引物量：每條引物的濃度0.1～1umol或10～100pmol，以低引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好，引物濃度偏高會(huì)引起錯(cuò)配和非特異性擴(kuò)增，且可增加引物之間形成二聚體的機(jī)會(huì)。
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