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小鼠表皮角質形成細胞

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更新時間:2025-02-27 21:47:06瀏覽次數:264

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產品簡介

供貨周期 現貨 規格 5×10?Cells/T25培養瓶
貨號 GOY-01X1002 應用領域 化工
主要用途 產品僅供科研使用    
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組織PKG-I激活性定量檢測試劑盒(A/B/C) 20次

詳細介紹

公司細胞現貨供應,質量有保證、*、實驗效果好,我司為您提供免費代測服務,同時提供最新價格、說明書、規格、用途、實驗原理等相關操作說明。

產品名稱

小鼠表皮角質形成細胞

規格

5×10?Cells/T25培養瓶

貨號

GOY-01X1002

產品介紹:

名稱    小鼠表皮角質形成細胞

2.組織來源:皮膚組織

3.產品規格:5×105cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介:

小鼠表皮角質形成細胞分離自皮膚組織;表皮位于動物皮膚的外層,由胚胎時期外胚層形成,具有抗摩擦和抗損傷的作用。表皮是皮膚的淺層結構,由復層扁平上皮構成。從基底層到表面可分為五層,即基底層、棘層、顆粒層、透明層和角質層。表皮角質形成細胞是一種能合成角質蛋白的上皮細胞,此類細胞為表皮的主體,由表皮深層始逐漸增殖、分化,并在成為角化的角質細胞中,細胞核與細胞器*消失,細胞亦失去生理功能而脫落。未脫落部分對機體尚有保護作用,故不必在洗擦身體時用力搓擦,使其過早脫失。表皮角質形成細胞主要分布于表皮基底層,在上皮程序性死亡后,細胞產生角化并移向表皮。體外培養的表皮角化細胞容易導致終末分化,不能充分增殖。角質形成細胞最終產生角質蛋白,在其向角質細胞演變過程中,一般可以分為四層,即基底層、棘層、顆粒層以及角質層。有人把前三層或前二層稱為生發層或馬爾匹基層。此外,在某些部位,特別在掌跖部位,角質層下方還可見到透明層。

5.方法簡介:

實驗室分離的小鼠表皮角質形成層細胞先中性蛋白酶消化、后胰蛋白酶-膠原酶混合消化法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質量檢測:

實驗室分離的小鼠表皮角質形成細胞PCK免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養信息:

培養基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin

產品貨號CM-M094

換液頻率每2-3天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態上皮細胞樣

傳代特性可傳1-2

消化液0.25%胰蛋白酶

培養條件氣相:空氣,95%;CO25%

細胞特點及處理:

產品特點:

1、 使用方便:不需昂貴設備。

2、 可以處理各種細菌菌體,包括新鮮菌液和冰凍菌體。

3、 將蛋白提取的時間縮短至30分鐘-1小時。

4、 采用溫和的中性裂解組分,保持蛋白活性。

5、 含蛋白穩定劑,提取的蛋白穩定。

6、 紫外檢測蛋白濃度時,背景干擾低。

7、 蛋白酶抑制劑抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制劑配方優化。蛋白酶抑制劑混合物包含6種獨立的蛋白酶抑制劑;每一種抑制劑可特異性抑制某一種或幾種蛋白酶活性。該混合物優化的組成使其可以抑制幾乎所有重要的蛋白酶活性,包括絲氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶等。

8、 本試劑盒中不有EDTA,與金屬螯和層析等兼容。

細胞處理:

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養基的培養瓶中培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1.棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2.2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。

3.6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。

4.將細胞懸液按1215的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。

QQ截圖20210907103850.png

 

細胞培養技巧:

一、凍存時的注意事項:

1. 在冷凍保存之前,應觀察細胞生長是否良好(log phase) 且存活率高,凍存的細胞密度為80 – 90 %最佳

2. 冷凍前檢測細胞是否保有其*性質,例如是否有雜細胞或者支原體等。

3. 使用的DMSO 應為試劑級等級,以5~10 ml 小體積分裝,4 度避光保存,勿作多次解凍。使用的甘油也應為試劑級等級,以高壓蒸汽

滅菌后避光保存。在開啟后一年內使用,因長期儲存后對細胞會有毒性。

4. 冷凍保存的細胞濃度:

4-1. 正常的成纖維細胞: 1-3x 10^6 cells/ml

4-2 雜交瘤細胞: 1~3 x 10^6 cells/ml,細胞濃度不要太高,某些雜交瘤會因冷凍濃度太高而在解凍24 小時后。

4-3.貼壁腫瘤細胞: 1 x 10^6,依細胞種類而異。腺癌類的細胞解凍后須較高之濃度,而HeLa 只需1-3 x 10^6 cells/ml。

4-4. 懸浮細胞: 5~10 x 10^6 cells/ml, 而淋巴類細胞須至少5 x 10^6 cells/ml

5. 冷凍保護劑濃度為5 %10 DMSO,若是不確定細胞之冷凍條件,在做冷凍保存之同時,亦應作一個backup culture,以防止冷凍失敗。

 

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使用方法:

收到細胞后,請按照以下方法進行操作。

1. 取出25cm2培養瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃5% CO2細胞培養箱中靜置6-8小時或者過夜,以穩定細胞狀態。

2. 待細胞達到80%匯合時準備進行傳代培養。

3. 細胞傳代

1) 吸出25cm2培養瓶中的培養基,用PBS清洗細胞一次;

2) 添加0.125%胰蛋白酶消化液約1mL至培養瓶中,37℃溫浴3min左右;倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后吸棄消化液,再加入*培養液終止消化;

3) 用吸管輕輕吹打混勻,按1:21:3等適當的比例進行接種傳代,然后補充新鮮的*培養基至5mL,放入37℃,5% CO2細胞培養箱中培養;

4) 待細胞*貼壁后,培養觀察。之后每隔2-3天更換新鮮的*培養基。

 

 


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