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大鼠角膜上皮細(xì)胞

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更新時(shí)間:2025-02-27 20:57:56瀏覽次數(shù):243

聯(lián)系我們時(shí)請(qǐng)說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
貨號(hào) GOY-01X1067 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
主要用途 產(chǎn)品僅供科研使用    
大鼠角膜上皮細(xì)胞的相關(guān)*:組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1 (SIRT1)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次
細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SIRT3)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次
組織沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SIRT3)活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 20次
細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 20次
組織沉默調(diào)節(jié)蛋白1(SIRT1)活性熒光定量檢測(cè)試劑盒 20次
細(xì)胞沉默調(diào)節(jié)蛋白3(SIRT3

詳細(xì)介紹

產(chǎn)品屬性: 

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號(hào)

大鼠角膜上皮細(xì)胞

5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶

GOY-01X1067

商品介紹:

名稱    大鼠角膜上皮細(xì)胞 

2.組織來源:眼角膜組織

3.產(chǎn)品規(guī)格:5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡(jiǎn)介:

大鼠角膜上皮細(xì)胞分離自眼角膜組織;角膜位于眼球前壁的一層透明膜,約占纖維膜的前1/6,從后面看角膜呈正圓形,從前面看為橫橢圓形。角膜厚度各部分不盡相同,中央部最薄。角膜有十分敏感的神經(jīng)末梢,如有外物接觸角膜,眼瞼便會(huì)不由自主地合上以保護(hù)眼睛。為了保持透明,角膜并沒有血管,透過外界空氣、淚液及房水獲取養(yǎng)份及氧氣。角膜分為五層,由前向后依次為:上皮細(xì)胞層、前彈力層、基質(zhì)層、后彈力層、內(nèi)皮細(xì)胞層。其主要功能如下:角膜是的無血管的組織,具有透明的特性和合成許多蛋白的功能,分三層細(xì)胞層,外層即是上皮細(xì)胞;角膜上皮細(xì)胞能參與先天性免疫,能感應(yīng)病原體存在并發(fā)出信號(hào)從而激活角膜防御系統(tǒng);角膜上皮細(xì)胞能高效表達(dá)醛脫氫酶。角膜上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)對(duì)研究角膜的生理學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)以及分子生物學(xué)都是極為重要的手段,常用于研究細(xì)胞代謝產(chǎn)物、病毒感染、各種生長(zhǎng)因子和藥物對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)的影響。

5.方法簡(jiǎn)介:

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠角膜上皮細(xì)胞采用胰蛋白酶-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法,并通過上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來,細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測(cè):

實(shí)驗(yàn)室分離的大鼠角膜上皮細(xì)胞經(jīng)PCK免疫熒光鑒定,純度可達(dá)90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息:

包被條件鼠尾膠原2-5μg/cm2

培養(yǎng)基含FBS、生長(zhǎng)添加劑、PenicillinStreptomycin

產(chǎn)品貨號(hào)CM-R120

換液頻率每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性貼壁

細(xì)胞形態(tài)上皮細(xì)胞樣

傳代特性可傳1-2

消化液0.25%胰蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相:空氣,95%CO25%

冷凍保存細(xì)胞之方法?

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ (-20 ℃30 分鐘*) → -80 ℃16~18 小時(shí)(或隔夜) → 液氮槽vaporphase 長(zhǎng)期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下, 再放入液氮槽vapor phase長(zhǎng)期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí), 以防止冰晶過大,造成細(xì)胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

88.jpg

實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)及說明:

1.本方法適用于貼壁細(xì)胞培養(yǎng),而不適用于懸浮細(xì)胞培養(yǎng),懸浮細(xì)胞可使用滴片法;

2.所使用的蓋玻片應(yīng)該為優(yōu)質(zhì)玻璃,并經(jīng)過鉻酸洗液處理;

3.蓋玻片非常薄,易碎,取放蓋玻片時(shí)動(dòng)作要輕;

4.如果需要更多生長(zhǎng)狀態(tài)一致的細(xì)胞,可以使用較大的培養(yǎng)皿,但不宜過大,以避免培養(yǎng)液的浪費(fèi)和增加污染機(jī)率;

5.如果細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)能力較差,可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,將成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

大鼠 GFRA1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 GM-CSF 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CNTFR 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 FCGR2B / CD32b 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 FCGR3A / CD16a 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CD64 / FCGR1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 FCGR2A / CD32a 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CD89 / FCAR 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 DLL1 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠 CNTF 基因全長(zhǎng)ORF克隆

大鼠角膜上皮細(xì)胞78-5000 pg/mL 登革熱病毒通用型(DFV-U)核酸檢測(cè)試劑盒(PCR-熒光探針法)

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human N-glycosylase/DNA lyase

吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂 英文名稱:Lecithin Tween 80 Nutrient Agar 產(chǎn)品規(guī)格:250g

7.8-500 ng/mL 人缺血修飾白蛋白(IMA)ELISA試劑盒

0.312-20 ng/mL 人扭轉(zhuǎn)蛋白2A(TOR2A)ELISA試劑盒

0.78-50 ng/mL ELISA Kit for Human Vitamin K-dependent protein C

匹克氏肉湯基礎(chǔ)B 英文名稱:Pick’s Broth Base B 產(chǎn)品規(guī)格:250g

78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human Desmoglein-2

0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Dual specificity protein phosphatase 4

7%羊血瓊脂基礎(chǔ) 英文名稱:7%Sheep Blood Agar Base 產(chǎn)品規(guī)格:250g

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