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【會議預(yù)告】抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選策略
近年來，抗體藥物逐漸成為生物藥物為熱門研究領(lǐng)域之一。治療性抗體因其高特異性、高親和性等特點，被冠以“魔法子彈”的美譽。
圖1 單克隆抗體、重鏈抗體、單域抗體的結(jié)構(gòu)示意圖
抗體藥開發(fā)是一個非常復(fù)雜的過程，而構(gòu)建適用于工業(yè)生產(chǎn)的高表達的細胞株是第一步也是最關(guān)鍵的步驟之一，它直接影響了生產(chǎn)的效率和目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量。因此，構(gòu)建及優(yōu)化穩(wěn)定的表達不同外源基因的重組工程細胞株的實驗研究至關(guān)重要。目前，治療性重組蛋白在許多診斷和治療中應(yīng)用廣泛。與合成藥物不同，蛋白藥物多來源于原核或真核表達系統(tǒng)。如大腸桿菌、哺乳或非哺乳動物細胞、昆蟲細胞等細胞系表達系統(tǒng)，以及近幾年熱門研究的無細胞表達系統(tǒng)。
圖2 生物藥物常用的表達系統(tǒng)
成功的構(gòu)建工程化細胞株，即從分離高產(chǎn)的哺乳動物細胞株至得到未來用于臨床和工程化生產(chǎn)的高產(chǎn)細胞株庫，是一個步驟繁瑣且漫長的過程，需要做大量的工作才能得到較高產(chǎn)的細胞株。以傳統(tǒng)的篩選流程來說，從轉(zhuǎn)染開始至minipool篩選，再到最后的單克隆篩選往往就要花費3-6個月的時間，而后還要進行穩(wěn)定性傳代實驗以研究其穩(wěn)定性，在得到高產(chǎn)單克隆后還要在上游細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)階段進行詳細的優(yōu)化與表征，綜合起來其研發(fā)周期相對于同類藥物來說顯著延長，依各公司研發(fā)實力不同，其細胞株篩選至細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)結(jié)束普遍需要6-12個月，甚至更長。而細胞株的構(gòu)建在整個抗體產(chǎn)量的流程中占有較小的成本，但是在提高大批量表達的產(chǎn)量時卻占有十分重要的地位。目前大部分的抗體藥物大都是由CHO細胞進行表達的。CHO細胞能夠進行正確的折疊、組裝和進行類似于人抗體的翻譯后修飾等能力，是生產(chǎn)重組蛋白類藥物主要的宿主細胞。
圖3 傳統(tǒng)CHO工程細胞株的構(gòu)建過程
結(jié)論
過去的十年里，抗體工業(yè)蓬勃發(fā)展。哺乳動物細胞仍是目前很受歡迎的宿主細胞。開發(fā)能穩(wěn)定表達的細胞株，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，是工業(yè)化生產(chǎn)抗體藥物的目標(biāo)，也是進行細胞培養(yǎng)過程優(yōu)化的主要目標(biāo)。但仍存在一些尚未解決的問題，例如抗體分子結(jié)構(gòu)上存在多種翻譯后修飾形式、具有顯著的“非均一性”、高產(chǎn)細胞株的篩選困難等問題。
為此，2022年12月14號晚上19:30-21:00，美谷分子和康日百奧將聯(lián)合生物制品圈共同舉辦《抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選策略》線上分享，共聚抗體藥物行業(yè)的資深專家，針對抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選所面臨的困難與挑戰(zhàn)，采用基本原理講解、案例分析和互動答疑等方式，圍繞行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀，對抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選策略展開研討，共促抗體藥物行業(yè)蓬勃發(fā)展。
參考文獻
報名參會
直播時間：12月14號 19:30-21:00
主題1：如何更加可靠地驗證單克隆性
獲得一株穩(wěn)定高產(chǎn)的細胞株往往需要篩選成千上萬個細胞克隆。除了找到這些稀有的優(yōu)質(zhì)細胞株，研究人員還需要證明它們源自單個細胞(即單克隆性)以滿足FDA的要求。
大綱：細胞株開發(fā)中常用的克隆方法；CloneSelect Imager成像系統(tǒng)，基于客觀的成像圖片更直觀、準(zhǔn)確地證實細胞株的單克隆性；以及高通量自動化解決方案。
王玉
Molecular Devices公司應(yīng)用科學(xué)家
畢業(yè)于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，微生物學(xué)專業(yè)，擁有7年抗體開發(fā)相關(guān)工作經(jīng)驗。現(xiàn)任 Molecular Devices 公司應(yīng)用科學(xué)家，主要負(fù)責(zé) BioProduction Development 產(chǎn)品線的技術(shù)支持工作。
主題2：生產(chǎn)用穩(wěn)定細胞株的開發(fā)策略 — 不僅僅是Titer
大綱：
1. 宿主細胞的選擇
2. 載體構(gòu)建策略
3. 細胞株篩選要點
4. 細胞株穩(wěn)定性
5. 監(jiān)管層面對細胞株的要求
朱一翔 康日百奧 技術(shù)運營副總經(jīng)理
畢業(yè)于華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點實驗室，近10年生物制藥行業(yè)經(jīng)驗，在生物藥CMC開發(fā)，技術(shù)轉(zhuǎn)移，生產(chǎn)和項目管理方面經(jīng)驗豐富。在中國主導(dǎo)開發(fā)了20余個單抗，雙抗和融合蛋白產(chǎn)品，其中已有11個獲得了包括NMPA，FDA和TGA的臨床研究批準(zhǔn)。
抗體藥開發(fā)是一個非常復(fù)雜的過程，而構(gòu)建適用于工業(yè)生產(chǎn)的高表達的細胞株是第一步也是最關(guān)鍵的步驟之一，它直接影響了生產(chǎn)的效率和目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量。因此，構(gòu)建及優(yōu)化穩(wěn)定的表達不同外源基因的重組工程細胞株的實驗研究至關(guān)重要。目前，治療性重組蛋白在許多診斷和治療中應(yīng)用廣泛。與合成藥物不同，蛋白藥物多來源于原核或真核表達系統(tǒng)。如大腸桿菌、哺乳或非哺乳動物細胞、昆蟲細胞等細胞系表達系統(tǒng)，以及近幾年熱門研究的無細胞表達系統(tǒng)。
圖2 生物藥物常用的表達系統(tǒng)
成功的構(gòu)建工程化細胞株，即從分離高產(chǎn)的哺乳動物細胞株至得到未來用于臨床和工程化生產(chǎn)的高產(chǎn)細胞株庫，是一個步驟繁瑣且漫長的過程，需要做大量的工作才能得到較高產(chǎn)的細胞株。以傳統(tǒng)的篩選流程來說，從轉(zhuǎn)染開始至minipool篩選，再到最后的單克隆篩選往往就要花費3-6個月的時間，而后還要進行穩(wěn)定性傳代實驗以研究其穩(wěn)定性，在得到高產(chǎn)單克隆后還要在上游細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)階段進行詳細的優(yōu)化與表征，綜合起來其研發(fā)周期相對于同類藥物來說顯著延長，依各公司研發(fā)實力不同，其細胞株篩選至細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)結(jié)束普遍需要6-12個月，甚至更長。而細胞株的構(gòu)建在整個抗體產(chǎn)量的流程中占有較小的成本，但是在提高大批量表達的產(chǎn)量時卻占有十分重要的地位。目前大部分的抗體藥物大都是由CHO細胞進行表達的。CHO細胞能夠進行正確的折疊、組裝和進行類似于人抗體的翻譯后修飾等能力，是生產(chǎn)重組蛋白類藥物主要的宿主細胞。
圖3 傳統(tǒng)CHO工程細胞株的構(gòu)建過程
結(jié)論
過去的十年里，抗體工業(yè)蓬勃發(fā)展。哺乳動物細胞仍是目前很受歡迎的宿主細胞。開發(fā)能穩(wěn)定表達的細胞株，提高產(chǎn)量和質(zhì)量，是工業(yè)化生產(chǎn)抗體藥物的目標(biāo)，也是進行細胞培養(yǎng)過程優(yōu)化的主要目標(biāo)。但仍存在一些尚未解決的問題，例如抗體分子結(jié)構(gòu)上存在多種翻譯后修飾形式、具有顯著的“非均一性”、高產(chǎn)細胞株的篩選困難等問題。
為此，2022年12月14號晚上19:30-21:00，美谷分子和康日百奧將聯(lián)合生物制品圈共同舉辦《抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選策略》線上分享，共聚抗體藥物行業(yè)的資深專家，針對抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選所面臨的困難與挑戰(zhàn)，采用基本原理講解、案例分析和互動答疑等方式，圍繞行業(yè)發(fā)展現(xiàn)狀，對抗體藥生產(chǎn)用細胞株構(gòu)建和篩選策略展開研討，共促抗體藥物行業(yè)蓬勃發(fā)展。
參考文獻
- 林健芬. 表達納米抗體CHO工程細胞株的構(gòu)建及優(yōu)化[D].江西中醫(yī)藥大學(xué),2022.DOI:10.27180/d.cnki.gjxzc.2022.000455
- 付云星. 抗PD-1抗體CHO工程細胞株的構(gòu)建及基于QbD理念的細胞培養(yǎng)工藝開發(fā)[D].河北科技大學(xué),2021.DOI:10.27107/d.cnki.ghbku.2021.000229
報名參會
直播時間：12月14號 19:30-21:00
主題1：如何更加可靠地驗證單克隆性
獲得一株穩(wěn)定高產(chǎn)的細胞株往往需要篩選成千上萬個細胞克隆。除了找到這些稀有的優(yōu)質(zhì)細胞株，研究人員還需要證明它們源自單個細胞(即單克隆性)以滿足FDA的要求。
大綱：細胞株開發(fā)中常用的克隆方法；CloneSelect Imager成像系統(tǒng)，基于客觀的成像圖片更直觀、準(zhǔn)確地證實細胞株的單克隆性；以及高通量自動化解決方案。
Molecular Devices公司應(yīng)用科學(xué)家
畢業(yè)于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，微生物學(xué)專業(yè)，擁有7年抗體開發(fā)相關(guān)工作經(jīng)驗。現(xiàn)任 Molecular Devices 公司應(yīng)用科學(xué)家，主要負(fù)責(zé) BioProduction Development 產(chǎn)品線的技術(shù)支持工作。
主題2：生產(chǎn)用穩(wěn)定細胞株的開發(fā)策略 — 不僅僅是Titer
大綱：
1. 宿主細胞的選擇
2. 載體構(gòu)建策略
3. 細胞株篩選要點
4. 細胞株穩(wěn)定性
5. 監(jiān)管層面對細胞株的要求
畢業(yè)于華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點實驗室，近10年生物制藥行業(yè)經(jīng)驗，在生物藥CMC開發(fā)，技術(shù)轉(zhuǎn)移，生產(chǎn)和項目管理方面經(jīng)驗豐富。在中國主導(dǎo)開發(fā)了20余個單抗，雙抗和融合蛋白產(chǎn)品，其中已有11個獲得了包括NMPA，FDA和TGA的臨床研究批準(zhǔn)。