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檢測胰高血糖 素 GLP-1 受體的 Kd 值

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Cisbio 的 Tag-lite HTRF 平臺(tái)能 夠 有效 地 用 HTRF 熒 光
團(tuán)標(biāo)記目標(biāo)位點(diǎn)上感興趣的蛋白。細(xì)胞表面受體可以插
入 SNAP-tag 質(zhì)粒中,然后用這種結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)染細(xì)胞并表達(dá)
標(biāo)記的受體。通過添加 snap -lumi4-Tb 底物,用鋱 (Tb)
穴狀化合物標(biāo)記受體。為了進(jìn)行結(jié)合試驗(yàn),受體的配體
用 HTRF 受體熒光團(tuán)標(biāo)記,例如 d2。當(dāng) d2 配體與鋱標(biāo)
記的受體結(jié)合時(shí),可以使用具備 HTRF 功能的微孔板讀
板機(jī)檢測受體到配體的時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移 (TRFRET) ( 圖 1)。
Cisbio 提供了多種標(biāo)簽和興趣蛋白標(biāo)記編碼的質(zhì)粒,以
及已經(jīng)用這些結(jié)構(gòu)物轉(zhuǎn)染的冷凍細(xì)胞。該結(jié)構(gòu)體能夠表
達(dá)標(biāo)記蛋白,如受體,可以用鋱標(biāo)記,同時(shí)其受體配體
( 激動(dòng)劑或拮抗劑 ) 用受體熒光團(tuán)標(biāo)記。Tag-lite 平臺(tái)適
用于廣泛的應(yīng)用,如受體二聚化、配體結(jié)合分析和第二信
使評估。結(jié)合動(dòng)力學(xué)可以研究藥物 - 蛋白質(zhì)復(fù)合物的結(jié)
合和解離速率,是優(yōu)化候選藥物體內(nèi)療效的必要步驟
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