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目錄:愛必信(上海)生物科技有限公司>>細胞生物學>>原代細胞分離>> abs47048002膠原酶III型,9001-12-1

膠原酶III型,9001-12-1
  • 膠原酶III型,9001-12-1
參考價 460
訂貨量 ≥1
具體成交價以合同協議為準
460
≥1
具體成交價以合同協議為準
  • 品牌 absin
  • 型號 abs47048002
  • 廠商性質 生產商
  • 所在地 上海市
屬性

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更新時間:2025-03-26 08:07:02瀏覽次數:2273評價

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CAS 9001-12-1 純度 活性≥100units/mg
分子量 - 分子式 -
供貨周期 現貨 規格 100mg;1g
貨號 abs47048002 應用領域 化工,生物產業,綜合
主要用途 常用于乳腺組織的原代細胞制備
本品是III型膠原酶,活性≥100units/mg凍干物,含較低的次級蛋白酶污染物水解活性,但具典型的膠原酶活性。常用于乳腺組織的原代細胞制備。

產品描述:

膠原酶(Collagenase)是一種蛋白水解酶,常用來消化細胞外基質蛋白。作為一種肽鏈內切酶,膠原酶特異性識別Pro-X-Gly-Pro序列(高頻出現在膠原collagen,很少在其他蛋白中發現)并切割氨基酸(X)和Gly之間的肽鍵。不同于其他蛋白酶,膠原酶是一種可識別并降解具三股超螺旋結構的天然膠原纖維,這種膠原纖維廣泛存在結締組織。


膠原酶來源于溶組織梭菌(Clostridiumhistolyticum),是一種酶粗提物,不僅含有梭菌蛋白酶A(Clostridiopeptidase A),能夠降解天然膠原和網狀纖維;還含有其他的一些蛋白酶、多糖酶、脂酶等,分別用以水解存在結蹄組織和上皮組織細胞外基質內的其他蛋白、多糖和脂質等。目前商業化的膠原酶因所含組分的差異分為五類,其在應用上具有一定區分。


本品是III型膠原酶,活性≥125units/mg凍干物,含較低的次級蛋白酶污染物水解活性,但具典型的膠原酶活性。常用于乳腺組織的原代細胞制備。


來源:溶組織梭菌

純度:活性>125CDU/mg


使用方法:

一、儲存液制備:
1、直接往100mg膠原酶內加入100µl含鈣鎂的HBSS緩沖液,輕輕漩渦震蕩確保充分溶解混勻。
2、根據具體批次的酶活力,用含鈣鎂的HBSS緩沖液調整酶濃度到100U/µl(1000×儲存液),之后用低蛋白吸附濾膜過濾除菌。
3、立即使用或將儲存液根據單次用量分裝,置于-20℃避光保存。
4、使用前置于冰上融化,避免反復凍融。建議膠原酶的工作濃度范圍50-200U/ml(或0.5-2.5mg/ml),具體使用濃度請根據具體消化對象或參考文獻來調整。


二、組織分離:
1、用無菌刀或剪刀將組織切成3-4mm小片,之后用含鈣鎂的HBSS緩沖液清洗組織片幾次;
2、加足量含鈣鎂的HBSS緩沖液浸沒組織片,之后按照50-200U/ml用量加入適量膠原酶;
3、37℃孵育4-18h,置于水平搖床并且孵育體系加入3mM CaCl2可提高消化效率。
4、將消化好的細胞混合物用無菌的不銹鋼或尼龍網過篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進一步解離。
5、將過篩收集到的細胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。
6、低速離心,吸掉清洗液。最后用適當的細胞培養液重懸細胞,使用自動細胞計數器或手動法進行活細胞數檢測。


三、器官灌注:
1、將膠原酶加入37℃預熱含鈣鎂的HBSS緩沖液,使其濃度為50-200U/ml,或根據具體實驗體系調整;另加入3mM CaCl2可提高消化效率。
2、按照針對特定器官的預優化頻率來進行灌注;
3、將收集到的細胞/組織混合碎片用無菌的不銹鋼或尼龍網過篩。殘留組織可再添加適量的新鮮膠原酶工作液于37℃孵育以進一步解離。
4、將過篩收集到的細胞用不含膠原酶的HBSS緩沖液清洗幾遍。
5、低速離心,吸掉清洗液。最后用適當的細胞培養液重懸細胞,使用自動細胞計數器或手動法進行活細胞數檢測。


儲存/保存方法:2-8℃干燥保存,可置于-20℃長期保存,有效期2年。

注意事項:為了您的安全和健康,請穿實驗服并戴一次性手套操作。

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