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大咖來(lái)襲!多靶點(diǎn)組織多色與空間表型微環(huán)境解析

閱讀:1396      發(fā)布時(shí)間:2023-11-28
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多重免疫組化,主要的技術(shù)原理來(lái)自TSA技術(shù),TSA即酪酰胺信號(hào)放大(Tyramide signal amplification)是一類(lèi)利用辣根過(guò)氧化酶(HRP)對(duì)靶蛋白或核酸進(jìn)行高密度原位標(biāo)記的酶學(xué)檢測(cè)方法。該技術(shù)可與高性能染料Alexa Fluor®、傳統(tǒng)熒光染料和比色檢測(cè)系統(tǒng)相兼容。 TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的過(guò)氧化物酶反應(yīng)(酪胺鹽在HRP催化H202下形成共價(jià)鍵結(jié)合位點(diǎn)),產(chǎn)生大量的酶促產(chǎn)物,該產(chǎn)物能與周?chē)牡鞍讱埢?包括色氨酸、組氨酸和酪氨酸殘基)結(jié)合,這樣在抗原-抗體結(jié)合部位就有大量的生物素沉積,與隨后加入的Streptavidin—HRP/熒光基團(tuán)結(jié)合,經(jīng)幾次這樣的循環(huán)放大,可以結(jié)合大量的酶分子or熒光基團(tuán),結(jié)果使其檢測(cè)信號(hào)得到幾何級(jí)放大。



簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō),用這種方法做多重免疫熒光是利用二抗上帶有的HRP(而不是直接偶聯(lián)熒光素),來(lái)催化后續(xù)添加入體系的非活性熒光素。熒光素在HRP和過(guò)氧化氫的作用下被活化,跟臨近蛋白的酪氨酸殘基共價(jià)偶聯(lián),使得蛋白樣品與熒光素穩(wěn)定結(jié)合。
然后微波處理,前一輪非共價(jià)結(jié)合的抗體被洗掉,共價(jià)結(jié)合的熒光素還留存在樣品上。再換個(gè)一抗來(lái)第二輪孵育,周而復(fù)始。等到所有抗體孵育結(jié)束,熒光素都結(jié)合好后,最后去檢測(cè)結(jié)果。

講座主題:大咖來(lái)襲!多靶點(diǎn)組織多色與空間表型微環(huán)境解析


講座時(shí)間:12月5日(周二)15:00-16:00


講座內(nèi)容:

1.多靶點(diǎn)組織多色與原位分析的技術(shù)原理與進(jìn)展

2.多維度解析組織實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分析技巧

3.組織空間大數(shù)據(jù)信息分析方法與案例分享


特邀嘉賓:

李光超 博士  TissueGnostics (TG) 公司

中國(guó)科學(xué)院動(dòng)物研究所畢業(yè),具有多年顯微成像及病理學(xué)分析領(lǐng)域工作經(jīng)驗(yàn),發(fā)表多篇SCI科研論文。著手打造專(zhuān)業(yè)的全景組織流式定量分析平

臺(tái),在腫瘤免疫微環(huán)境、精準(zhǔn)醫(yī)療和個(gè)體化治療等領(lǐng)域具有豐富經(jīng)驗(yàn)。

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