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三種細胞消化的方式你知道哪個

閱讀:2767      發布時間:2022-5-16
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  常規的細胞實驗(增殖,凋亡,遷移,分化之類的),受消化影響不是很大,如果不用胰酶去孵育而使用潤洗的方法消化(難消化細胞例外)即可。但少數實驗,比如病毒包裝,對細胞代數,對細胞狀態要求*。這個時候,胰酶消化,就是潤洗,都會對細胞包裝病毒的能力有影響,傳代次數一多,細胞包裝能力就會逐漸下降(當然也有其它因素影響包裝效率)。這個時候都不用胰酶消化,用一些鹽溶液(不是EDTA液)即可。這些鹽溶液通過影響ECM相關酶的活性,來使得細胞脫離基質附著表面,但不切割任何蛋白。
  細胞消化三種方式
  機械消化法
  直接用液體吹打或用刮刀,施予外力讓細胞與培養底物分離;適用于貼壁性弱的細胞傳代,但相較于其它消化方法,這種外力無法量化控制,細胞分散效果差,且可能會造成大量細胞破損,使內容物釋放到培養基,進而影響細胞傳代狀態。
  離子螯合法
  細胞膜表面蛋白大多需要鈣、鎂離子來維持與胞外基質的穩定鍵結,當然也包含各種黏附蛋白(例:整合素、鈣黏著蛋白、橋粒等),螯合劑會在不破壞細胞膜表面蛋白的狀況下,抽離這些離子,使黏附蛋白失活而減少細胞-細胞間及細胞-底物間的連接作用,讓細胞較容易在施予外力時,脫離培養底物并促進細胞分散。
  0.02% EDTA是細胞傳代常用的離子螯合劑,在37℃作用效果很佳(消化較敏感的細胞可在4℃作用),適用于消化一般貼壁性細胞或細胞表面標記實驗細胞。
  但EDTA無法用血清終止其反應,所以在消化細胞后必須用緩沖鹽溶液(如:PBS)清洗離心,以免影響后續細胞貼盤效果。
  酶消化法
  用蛋白水解酶消化連接細胞及培養底物的蛋白質,適用于消化貼壁性稍強的細胞。

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