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中性粒細胞呼吸爆發(fā)定量檢測試劑盒簡介

閱讀:3523      發(fā)布時間:2017-3-30
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 中性粒細胞(PMNs)的吞噬作用在抵御細菌、真菌等病原微生物感染過程中發(fā)揮重要作用。吞噬作用過程包括幾個主要階段: 趨化,黏附,內(nèi)吞,胞內(nèi)氧依賴性(呼吸爆發(fā))和氧非依賴性的殺傷。 正常條件下細菌感染后,機體PMNs被激活,PMNs吞噬和氧化功能增強是機體重要的天然免疫防御機制。因此通過觀察PMNs的活化狀態(tài)可以幫助了解機體細菌感染的狀況。

 

愛必信(Absin)提供的試劑盒采用流式細胞儀(FMC)檢測PMNs功能,用PMA作為刺激劑,以二氫若丹明作為熒光底物。中性粒細胞受刺激后產(chǎn)生反應(yīng)性氧化物,氧化二氫若丹明為可發(fā)出熒光的若丹明123。這個反應(yīng)可以由溶血素終止。產(chǎn)生的反應(yīng)性氧化物可以用熒光強度來表示。PMNs活化和機體的天   然免疫能力。可用于研究在各種病理情況下如感染、自身免疫疾病、應(yīng)急、腫瘤、手術(shù)等中中性粒細胞的功能改變及藥物的效果評價。該試劑盒不僅用于人,還可以用于小鼠、大鼠、兔、狗、牛等其他種屬。

 操作步驟:
1. 無菌肝素抗凝的全血50ul,加刺激劑(如PMA)50ul, 37°C 孵育15分鐘。
2.加二氫若丹明25ul, 37°C避光孵育5分鐘
3.溶血素用無菌去離子水1:10稀釋,加稀釋后的溶血素1ml ,室溫避光溶血15分鐘
4.PBS洗滌2次,1500rpm離心5分鐘,去上清液
5.加0.5mlPBS重懸細胞,上流式細胞儀檢測
 
實驗結(jié)果示例圖:
 
 
圖1前向角、側(cè)向角點狀圖譜                               圖2 靜止、活化中性粒細胞FL1熒光柱狀圖譜

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