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為確定有無支原體污染可做如下檢測：

1.相差顯微境檢測

將細胞按種于事先放置于培養瓶內的蓋玻片上，24h后取出，用相差油鏡觀察，支原體呈暗色微小顆粒位于細胞表面和細胞之間。

2.熒光染色法

熒光染色用能與DNA特異性結合的熒光染料Hoechst 33258，可使支原體內含有的DNA著色，染色后用熒光顯微鏡觀察。具體方法如下：首先將細胞接種蓋玻片上，在細胞未長滿前取出玻片，用不合酚紅的 Hanks液漂洗一下，用l： 3醋酸甲酵固定10Min，然后用生理鹽水漂洗，置于用生理鹽水配濃度為50pg／ml的Hoechst 33258中染色10min。染色后用蒸溜水洗1-2min，向細胞面滴加pH5．5磷酸緩沖液數滴，然后置熒光顯微鏡下觀察。鏡下支原體為散在于細胞同圍或附于細胞膜表面的亮綠色小點。

3.電鏡檢查

用掃描電鏡方法簡便快速，也可以利用透射電鏡。

4.DNA分子條文檢查或支原體培養等方法

檢出率高，但方法較為復雜。

支原體是一類缺乏細胞壁的原核細胞型微生物，大小一般在0.3-0.5μm之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲狀、分枝狀等多種形態。它不同于細胞，也不同于病毒。支原體用普通染色法不易著色，用姬姆薩染色很淺，革蘭染色為陰性。支原體可在雞胚絨毛尿囊膜上或細胞培養中生長，營養要求比細菌高。

支原體污染的來源包括工作環境的污染、操作者本身的污染（一些支原體在人體是正常菌群）、培養的污染、污染支原體的細胞造成的交叉污染、實驗器材帶來的污染和用來制備細胞的原始組織或器官的污染。細胞培養工作中，主要從以下幾個方面來預防支原體的污染：控制環境污染；嚴格實驗操作；細胞培養和器材要保證無菌；在細胞培養中加入適量的抗生素。