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CRISPR再現新系統,PCR Clean助力分子生物學研究

閱讀:559      發布時間:2023-12-16
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分子生物學實驗,需要定期清潔實驗環境,德國MB公司的PCR Clean,高效清除實驗室中的DNADNA酶、RNARNA酶污染。

 

測序數據庫的系統挖掘是發現蛋白質家族和功能系統的有力方法。這種方法已經發現了多種CRISPR-Cas系統,這些系統是微生物rna引導的適應性免疫系統,已成為幾種分子技術的基礎,特別是可編程基因組編輯。然而,現有的序列挖掘方法落后于現在包含數十億蛋白質的指數增長數據庫,這限制了罕見蛋白質家族和關聯的發現。

 

研究人員試圖在所有現有的公開可用的測序數據中全面列舉crispr相關的基因模塊。最近,一些以前未知的生化活動與CRISPR系統的可編程核酸識別有關,包括轉位和蛋白酶活性。我們推斷,更多不同的酶活性可能與CRISPR系統相關,其中許多可能在現有序列數據庫中豐度較低。

 

相關研究發表在《Science》上,文章標題為:“Uncovering the functional diversity of rare CRISPR-Cas systems with deep terascale clustering"。

 

科研人員開發了基于位置敏感哈希的快速聚類(FLSHclust),這是一種基于位置敏感哈希的線性縮放的并行深度聚類算法。FLSHclust在聚類性能上接近黃金標準的二次縮放算法MMseqs2。科研人員將FLSHclust應用于一個敏感的CRISPR發現管道,并確定了188個以前未報道的CRISPR相關系統,包括許多罕見的系統。

 

科研人員對新發現的四個系統進行了實驗表征。研究人員檢測了在crispr相關DNA損傷誘導基因G (DinG)樣解旋酶中插入HNH核酸酶結構域的IV型系統。研究發現該系統表現出rna引導的原間隔器鄰近基序(PAM)依賴的定向雙鏈DNA (dsDNA)降解,這需要三磷酸腺苷(ATP)水解和DinG-HNH蛋白的HNH核酸酶功能。這是具有特定干擾機制的IV型系統的演示。研究鑒定了兩種I型系統,它們含有插入在Cascade的不同亞基(Cas8-HNHCas5-HNH)中的HNH核酸酶結構域。研究發現這兩個系統都進行精確的雙鏈DNA切割和單鏈DNA (ssDNA)切割。科研人員還觀察到Cas5-HNH系統對ssDNA的側支切割。科研人員證明了這兩種系統都可以應用于人類細胞的基因組編輯,并且Cas8-HNH系統具有高度特異性。我們還研究了候選的VII型系統,包括一個最小的Cas7-Cas5效應復合物和一個干擾蛋白,包括一個β-CASP結構域。這些新發現的系統可能來源于III-ECRISPR系統,并且是RNA靶向的。

 

研究發現的其他CRISPR連接系統,包括額外的潛在效應和適應成分,兩個以前未知的Mu轉座子與CRISPR系統的關聯,以及許多新發現的與V型系統相關的蛋白質和結構域。我們還發現了Cas9作為抗crispr機制的潛在共選擇實例,并注意到幾個非crispr高變量有規律地穿插重復序列。


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