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美國食品和藥物管理局（FDA）規定，用于細胞治療的產品，需要通過支原體檢測，來保障產品在使用過程中的無菌性和安全性。

在細胞培養實驗中，支原體污染的風險較高。以目前版本的各國藥典中記載，28天培養法是“金標準"，但對于應用于臨床的生物制品來說，這種方法并不符合實際的需求。速度更快、靈敏度更高和特異性更強的NAT法，經過方法學驗證，也可替代藥典中的傳統方法。

一項“FGFR抑制劑的臨床開發"的科學研究中，研究人員使用德國MB公司的Venor®GeM qEP支原體檢測試劑盒，對其使用的細胞系進行支原體風險評估。

研究背景

成纖維細胞生長因子受體(FGFR)受體酪氨酸激酶(RTK)家族包含四個成員- FGFR1, FGFR2, FGFR3, FGFR4。FGFR在細胞增殖、遷移、血管生成和存活中起著關鍵作用。FGF/FGFR信號通路失調可導致不同腫瘤類型的形成，包括膀胱癌、胃癌、子宮內膜癌和肺癌。因此，靶向FGFR為FGFR依賴性腫瘤患者的抗癌治療提供了一個有吸引力的策略。

研究人員發現了了CPL304110，一種有效的、選擇性的小分子，作為FGFR 1/2/3抑制劑，可以用作FGFR畸變癌癥的潛在藥物。

研究結果

首先，測試了對FGFR激酶的潛在抑制作用。化合物CPL304110對FGFR2、FGFR1 和FGFR3活性的抑制相對更強。在接下來的實驗中，研究人員分析了CPL304110對7種激酶的選擇性，這些激酶與FGFR受體(VEGFR2、PDGFRβ)具有更高的結構同源性，或在腫瘤發生和進展中發揮重要作用(AURKA、FLT3、IGF1R、JAK2、TRKA)。TRKA激酶和KDR的抑制值顯著。

最后，研究人員對CPL304110進行了針對468個激酶的廣泛體外篩選。

在該研究中，研究結果表明，CPL304110是一種有效的FGFR1、FGFR2、FGF3抑制劑，同時對CSF1R、FLT3(D835V)、KIT(A829P)、RET、RIPK1、TRKA、TYK2、KIT(V559D)RET(M918T)也有很強的抑制活性。額外的抑制作用可能不僅是有益的，而且還表明CPL304110是治療具有特定突變的癌癥患者的有希望的藥物。

CPL304110的抗增殖活性在一組不同來源和FGFR依賴性的人腫瘤細胞系中被確定。在正常的非腫瘤細胞系HUVEC上驗證了CPL304110對細胞增殖的影響，以確定其潛在的安全閾值。用CPL304110處理的細胞顯示FGFR介導的信號激活顯著降低。

在體內，口服CPL304110在所有被測試的異種移植模型中都具有很強的抗腫瘤功效。

相關實驗

對不同癌細胞和對照細胞系進行了化合物細胞毒性評估。在研究中使用了兩種類型的細胞系：

• 與已確認的FGFR基因異常相關的FGFR依賴性細胞系

• FGFR非依賴性細胞系。

研究人員還使用正常細胞系HUVEC作為對照。所有細胞系均按照生產廠家的說明進行培養，并通過Venor®GeM qEP 支原體檢測試劑盒（Minerva Biolabs的qPCR產品）進行了支原體檢測，并確認為陰性。