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支原體檢測(cè),工業(yè)和科研有何不同?

閱讀:876      發(fā)布時(shí)間:2022-11-4
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細(xì)胞培養(yǎng)中的支原體檢測(cè),分為工業(yè)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。


工業(yè)包括生物藥生產(chǎn)、CAR-T、干細(xì)胞治療、疫苗生產(chǎn)等,需要對(duì)主細(xì)胞庫(kù)、病毒收獲液、體外擴(kuò)增的細(xì)胞等進(jìn)行支原體檢查。該檢查的方法依據(jù)是藥典。

普通科研實(shí)驗(yàn)室中的支原體檢測(cè)則需要保證細(xì)胞中沒(méi)有支原體污染,沒(méi)有詳細(xì)的方法規(guī)定。


那么,工業(yè)和科研檢支原體還有哪些區(qū)別呢?


檢測(cè)方法方面


工業(yè)可使用培養(yǎng)法、指示細(xì)胞培養(yǎng)法和NAT法(核酸擴(kuò)增技術(shù)Nucleic acid testing)。NAT法最常見(jiàn)的就是PCR和熒光定量PCR。只限定了這三種。NAT在方法驗(yàn)證后,可以替代前面兩種方法。適合CAR-T等的放行檢測(cè)。


科研則可采用各種方法,但一般不采用培養(yǎng)法,因?yàn)樵摲椒ê臅r(shí)長(zhǎng),效率低。科研檢支原體常見(jiàn)方法有PCR法、qPCR法、酶熒光法、恒溫?cái)U(kuò)增法、DNA染色法、細(xì)胞感應(yīng)法等。


用途方面


工業(yè)檢支原體用于過(guò)程控制、放行檢測(cè)。生產(chǎn)前和生產(chǎn)后的成品都需要檢。


科研檢支原體是避免支原體污染細(xì)胞,干擾實(shí)驗(yàn),一般是一周就要監(jiān)測(cè)一次。


污染程度


工業(yè)上支原體污染風(fēng)險(xiǎn)主要是存在于細(xì)胞和成品中,需檢測(cè)的樣本,不一定是含血清的培養(yǎng)體系。在該過(guò)程中,如果發(fā)生支原體污染,通常情況下,支原體含量會(huì)比較低,因而需要方法的靈敏度高,達(dá)到10CFU/ml。


科研上支原體污染的風(fēng)險(xiǎn),主要是存在于細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中。科研過(guò)程中,如果發(fā)生支原體污染,往往因檢測(cè)不及時(shí)而更容易被忽視。再加上培養(yǎng)液中含有血清,支原體繁殖較快,一旦出現(xiàn)癥狀時(shí),支原體的污染程度已經(jīng)處于較高的水平,因而對(duì)方法的靈敏度相對(duì)會(huì)低一些,而更看重方便程度。


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