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支原體對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)會(huì)帶來嚴(yán)重的危害，同時(shí)，它的發(fā)生率較高，肉眼不易察覺。有報(bào)道，在細(xì)胞培養(yǎng)室中，它的平均發(fā)生率甚至可高達(dá)63%。在生物制品中，它的發(fā)生率為1%~3%。

污染細(xì)胞的支原體主要有五個(gè)方面的可能來源：

1. 環(huán)境

2. 被污染的細(xì)胞

3. 人體表面的攜帶（如口腔、鼻腔、皮膚等）

4. 實(shí)驗(yàn)試劑，如培養(yǎng)基、胰酶等

5. 未*消毒的實(shí)驗(yàn)器具

傳統(tǒng)的支原體檢測(cè)方法有哪些呢？

方法一：培養(yǎng)法。直接將待測(cè)樣品涂布在支原體液體或固體培養(yǎng)基上，讓其生長，一般需要數(shù)周，才能看到菌液變渾濁或有菌落長出。 培養(yǎng)法是支原體檢測(cè)經(jīng)典的方法，其優(yōu)點(diǎn)是：靈敏度適中和結(jié)果可靠。但是培養(yǎng)法的一個(gè)主要缺點(diǎn)是時(shí)間周期太長，不適合作為細(xì)胞污染的快速檢測(cè)方法。

方法二：DNA的熒光染色法。熒光染劑（如Hoechst 33258，DAPI）可以結(jié)合到細(xì)胞和支原體的DNA。被支原體污染的細(xì)胞經(jīng)染色后，如果在細(xì)胞核外與細(xì)胞周圍可看到許多大小均一之熒光小點(diǎn)，即為支原體的DNA，則證明有支原體之污染。該法相對(duì)培養(yǎng)法快速，但是靈敏度較差。當(dāng)用熒光染色法發(fā)現(xiàn)有支原體后，支原體的清除相對(duì)就較困難。

方法三：掃描電鏡法。將細(xì)胞樣品進(jìn)行掃描電鏡拍照，如果被支原體污染可以在細(xì)胞表面看到密密麻麻的小顆粒。該方法由于要使用電子顯微鏡，不適合用作實(shí)驗(yàn)室常規(guī)檢測(cè)。

方法四：PCR法。PCR法相對(duì)較快，靈敏度也較高。是目前實(shí)驗(yàn)室常用的支原體檢測(cè)方法。但是PCR法也有自己的致命缺點(diǎn)：細(xì)胞培養(yǎng)液上清常含有強(qiáng)烈抑制PCR擴(kuò)增的代謝產(chǎn)物。因?yàn)楹芏嘌芯咳藛T直接使用細(xì)胞培養(yǎng)液上清原液進(jìn)行PCR檢測(cè)，如果檢測(cè)為陰性就認(rèn)為沒有支原體污染。其實(shí)，還有一種可能性，就是PCR的擴(kuò)增被細(xì)胞的代謝產(chǎn)物抑制了，而不是沒有支原體污染！

通常來說，被污染的細(xì)胞應(yīng)該丟棄，以避免成為污染源。但對(duì)于珍貴的細(xì)胞，以往別的品牌的支原體清除劑，其實(shí)只是抑制劑，它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成，但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結(jié)合，破壞膜通透性，導(dǎo)致支原體膨脹破裂而死。