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貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶及如何控制胰酶消化時(shí)間

閱讀:1874      發(fā)布時(shí)間:2022-4-24
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現(xiàn)代生物技術(shù)一般認(rèn)為包括基因工程技術(shù)、細(xì)胞工程技術(shù)、酶工程技術(shù)和發(fā)酵工程技術(shù),而這些技術(shù)的發(fā)展幾乎都與細(xì)胞培養(yǎng)有密切關(guān)系,特別是在醫(yī)藥領(lǐng)域的發(fā)展,細(xì)胞培養(yǎng)更具有特殊的作用和價(jià)值。比如基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHO細(xì)胞作為載體;細(xì)胞工程中更是離不細(xì)胞培養(yǎng),雜交瘤單克隆抗體,*是通過細(xì)胞培養(yǎng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的,既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細(xì)胞培養(yǎng)。正在倍受重視的基因治療、體細(xì)胞治療也要經(jīng)過細(xì)胞培養(yǎng)過程才能實(shí)現(xiàn),發(fā)酵工程和酶工程有的也與細(xì)胞培養(yǎng)密切相關(guān)。總之,細(xì)胞培養(yǎng)在整個(gè)生物技術(shù)產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起到了很關(guān)鍵的核心作用。

貼壁細(xì)胞傳代如何使用胰酶?

一般使用trypsin-EDTA濃度為0.25% trypsin-0.53 mM EDTA.2Na或0.05%trypsin-0.02 mM EDTA.2Na。消化液濃度過高時(shí),易造成培養(yǎng)基中細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,常規(guī)細(xì)胞傳代時(shí)建議用0.05%的胰酶進(jìn)行消化,對(duì)于難消化的細(xì)胞可采用0.25%胰酶進(jìn)行消化,細(xì)胞密度過高超過80%時(shí),采用分步消化法。胰酶儲(chǔ)存在–20°C,解凍在4°C進(jìn)行,第一次開瓶后應(yīng)立即少量分裝于無(wú)菌試管中,保存于–20°C,避免反復(fù)冷凍解凍造成trypsin之活性降低,并可減少污染之機(jī)會(huì)。

如何控制胰酶消化時(shí)間?

胰酶消化的程度是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)關(guān)鍵步驟:消化過度細(xì)胞碎片增多,黑渣子增多,細(xì)胞會(huì)成片脫落,嚴(yán)重影響細(xì)胞活性,并有部分細(xì)胞漂浮,隨棄去的胰酶流失;消化不足則細(xì)胞難于從瓶壁上吹下,反復(fù)吹打同樣也會(huì)損傷細(xì)胞活性。

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