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細胞生存環境、條件和代謝

閱讀:1942      發布時間:2022-4-19
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培養細胞生存途徑和物質代謝與體內細胞基本相同,隨生存環境改變出現一定差異。

(一)環境

培養環境無毒和無菌是保證培養細胞生存的首要條件。保證細胞生存環境無任何污染、代謝物及時清除,是維持細胞生存的基本條件。

(二)溫度:

人哺乳動物:36.5℃±0.5℃;

鳥類:38.5℃;

培養細胞對低溫耐受力比高溫強;溫度上升不超過39℃時,細胞代謝強度與溫度成正比。

39~40℃1小時,受損傷的細胞可能恢復;

41~42℃1小時,嚴重損傷,個別細胞恢復;

43℃以上1小時,細胞全部死亡

溫度不低于0℃時,細胞代謝有影響,無傷害作用;

置于 25~35℃,細胞能生存,但生長速度減慢;

放在 4℃ 數小時,再放回 37℃ 細胞仍繼續生長。

細胞代謝隨溫度降低而緩慢,溫度降至冰點以下時,細胞因胞質結冰受損而死亡。

(三)氣體環境和氫離子濃度

氣體:氧氣和二氧化碳

氧氣:參與三羧酸循環產生能量供給細胞生長、增殖和合成各種所需成分。

開放式培養(碟皿或培養瓶松蓋培養)細胞置于95%空氣加5%二氧化碳混合氣體環境中。

CO2:細胞代謝產物, 是細胞所需成分。

主要作用:維持培養基的pH值。大多數細胞的適宜pH7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。

有些細胞存在差異。如羊水細胞培養檢測染色體時pH為7.6。

細胞耐酸比耐堿性大一些,在偏酸性環境中更有利于細胞生長。

為了維持培養液恒定的pH,常用磷酸緩沖劑方法。

磷酸緩沖劑中NaHco3,可供給CO2但容易逸出,適用:封閉式培養的細胞。(無CO2培養箱)

Hanks平衡液:含有低濃度的NaHCO3,當打開含有Hank液培養瓶時,CO2迅速逸出而導致酚紅指示劑變紅,表明培養液pH變堿,細胞在堿性的環境中時間過長可使細胞堿中毒。

羥yi基pai嗪乙硫磺酸(N`-2-Hydroxyethyl Piperazine-N`-Ethanesulfonic Acid縮寫HEPES)

HEPES:對細胞無毒性也不起緩沖作用,主要作用是:防止pH迅速變動,在開瓶通氣培養或活細胞觀察時能維持恒定的pH。

(四)細胞生存所需基本物質

與體內基本相同,除碳水化合物、氨基酸、脂類三大類營養物質外,一定量的無機鹽、維生素和微量元素等,但需要的量以及代謝方式與體內細胞不盡相同。

糖:六碳糖是主要的能源通過糖酵解 形成 乳酸和通過檸檬酸形成 CO2。

胚胎細胞和一些轉化細胞的培養基中常見到乳酸堆積現象。

糖是合成某些氨基酸的原料;

經過乙酰fu酶A(CoA)合成脂肪;

經過糖解磷酸通路能合成核酸。

各種糖的吸收取決于它們進入細胞的能力,其中葡萄糖*,半乳糖zui低

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