培養細胞生存途徑和物質代謝與體內細胞基本相同，隨生存環境改變出現一定差異。
（一）環境
培養環境無毒和無菌是保證培養細胞生存的首要條件。保證細胞生存環境無任何污染、代謝物及時清除，是維持細胞生存的基本條件。
(二)溫度：
人哺乳動物：36.5℃±0.5℃;
鳥類：38.5℃;
培養細胞對低溫耐受力比高溫強；溫度上升不超過39℃時,細胞代謝強度與溫度成正比。
39～40℃1小時,受損傷的細胞可能恢復；
41～42℃1小時,嚴重損傷,個別細胞恢復；
43℃以上1小時，細胞全部死亡
溫度不低于0℃時,細胞代謝有影響,無傷害作用;
置于 25～35℃，細胞能生存，但生長速度減慢；
放在 4℃ 數小時,再放回 37℃ 細胞仍繼續生長。
細胞代謝隨溫度降低而緩慢，溫度降至冰點以下時,細胞因胞質結冰受損而死亡。
(三)氣體環境和氫離子濃度
氣體：氧氣和二氧化碳
氧氣:參與三羧酸循環產生能量供給細胞生長、增殖和合成各種所需成分。
開放式培養(碟皿或培養瓶松蓋培養)細胞置于95％空氣加5％二氧化碳混合氣體環境中。
CO2：細胞代謝產物, 是細胞所需成分。
主要作用:維持培養基的pH值。大多數細胞的適宜pH7.2~7.4，偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。
有些細胞存在差異。如羊水細胞培養檢測染色體時pH為7.6。
細胞耐酸比耐堿性大一些,在偏酸性環境中更有利于細胞生長。
為了維持培養液恒定的pH，常用磷酸緩沖劑方法。
磷酸緩沖劑中NaHco3,可供給CO2但容易逸出，適用：封閉式培養的細胞。（無CO2培養箱）
Hanks平衡液：含有低濃度的NaHCO3,當打開含有Hank液培養瓶時，CO2迅速逸出而導致酚紅指示劑變紅，表明培養液pH變堿，細胞在堿性的環境中時間過長可使細胞堿中毒。
羥yi基pai嗪乙硫磺酸(N`-2-Hydroxyethyl Piperazine-N`-Ethanesulfonic Acid縮寫HEPES)
HEPES：對細胞無毒性也不起緩沖作用，主要作用是：防止pH迅速變動，在開瓶通氣培養或活細胞觀察時能維持恒定的pH。
（四）細胞生存所需基本物質
與體內基本相同，除碳水化合物、氨基酸、脂類三大類營養物質外，一定量的無機鹽、維生素和微量元素等，但需要的量以及代謝方式與體內細胞不盡相同。
糖：六碳糖是主要的能源通過糖酵解 形成 乳酸和通過檸檬酸形成 CO2。
胚胎細胞和一些轉化細胞的培養基中常見到乳酸堆積現象。
糖是合成某些氨基酸的原料；
經過乙酰fu酶A（CoA）合成脂肪；
經過糖解磷酸通路能合成核酸。
各種糖的吸收取決于它們進入細胞的能力,其中葡萄糖*,半乳糖zui低。
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