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支原體祛除劑使用攻略

閱讀:691      發布時間:2022-4-18
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細胞實驗支原體的影響"

支原體在自然界廣泛存在,尤其可以寄生于人、哺乳動物、植物、昆蟲等物種。

人的口腔、鼻腔、皮膚、呼吸道等均可攜帶支原體,支原體可以說是無處不在,在細胞實驗過程中,操作稍有不慎,造成細胞支原體感染的風險就大大增加。

在細胞間里,支原體對細胞培養的污染風險不容忽視。

首先細胞感染支原體早期沒有顯著表現。等到實驗人員發現細胞異常了,此時細胞基本已經“病入膏肓",感染十分嚴重了。

其次,常規的抗生素對支原體無效。一旦發生污染,支原體會影響細胞基因表達和營養代謝改變,嚴重干擾實驗結果(包括細胞轉染和病毒包被)

因此,支原體污染對細胞培養影響重大,一定要重視起來!


1

有效去除支原體的方法

"如果培養的細胞發生了支原體污染的情況,我們首先建議大家丟棄被污染的細胞,并進行*的消殺。

如果細胞很重要,不能丟棄,那么推薦使用專業的支原體祛除試劑,既安全,又高效(畢竟甲醛熏蒸、次氯酸鈉、酒精這些東西,既容易對實驗人員造成損害,效率也比較低)

以支原體祛除劑Zell Shield®為例,進行說明。

Zell Shield®是一種復合抗生素類產品,加入到細胞培養基中,通過阻止支原體、真菌、霉菌、致命病菌增殖過程中DNA及蛋白的合成,有效抑制微生物的增殖,對大多數革蘭氏陽性和陰性細菌、霉菌、酵母、原蟲也同樣有效。

Zell Shield®適合如下兩種情況:

1)培養的細胞面臨支原體的高污染風險,尤其是取自生物有機體的原代細胞。這時建議在培養基中加1%的Zell Shield®

2)發現細胞已被支原體污染,而不愿意丟棄(如已轉染,已經體外刺激或已費力擴增的細胞),希望繼續培養,這時可采用下面的“懸浮沖洗法"進行支原體的祛除。

對于非常珍貴的細胞或不易獲得的生物樣品(如細胞種子),發現有支原體污染,希望挽救。這時我們推薦使用MB公司的Mynox®或Mynox Gold®進行支原體的祛除。

Zell Shield®的用法如下:

1)常規使用

Zell Shield®為-18℃避光保存。使用前,建議融化分裝。避免反復凍融。

Zell Shield®按1:100直接加入到新鮮配制的培養基。例如:500ml培養基中添加5ml Zell Shield®,混合后在2~8℃保存可至少4周。37℃進行培養時,最多7天需要更換新的含有Zell Shield®的培養基,以獲得最大的保護。

支原體祛除劑使用攻略


說明:Zell Shield®在培養基過濾前或過濾后加均可。如果培養基尚未無菌過濾,可在加入Zellshield®后再進行無菌過濾。

一般情況下,使用了Zell Shield®,就不必再額外添加雙抗了。


2)懸浮沖洗法(適合已有支原體污染的細胞)

約98%的支原體存在于細胞表面和細胞間隙。細胞傳代前,用干凈的PBS懸浮沖洗3次,就能把70%以上的支原體沖洗下來,再通過低速離心,棄上清,即可祛除大部分支原體(離心后細胞沉淀,沖洗下來的支原體在上清中)。再繼續用含1%Zell Shield®的培養基持續培養。細胞再連續傳代3次,每次都用PBS對細胞進行懸浮沖洗,并用含1%Zell Shield®的培養基培養(見下圖),即可逐漸祛除細胞中的支原體。


另外,需要說明的是ZellShield®含有氟喹諾酮類藥物,可與其他抗生素聯合使用,作為耐藥性標記。其他抗生素成分不用作耐藥性標記。


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