細胞培養(yǎng)（cell culture）是指在體外模擬體內(nèi)環(huán)境（無菌、適宜溫度、酸堿度和一定營養(yǎng)條件等），使之生存、生長、繁殖并維持主要結(jié)構(gòu)和功能的一種方法。細胞培養(yǎng)也叫 細胞克隆技術(shù) ，在生物學中的正規(guī)名詞為細胞培養(yǎng)技術(shù)。不論對于整個 生物工程技術(shù) ，還是其中之一的 生物克隆技術(shù) 來說，細胞培養(yǎng)都是一個必bu可少的過程，細胞培養(yǎng)本身就是細胞的大規(guī)模 克隆 。細胞培養(yǎng)技術(shù)可以由一個細胞經(jīng)過大量培養(yǎng)成為簡單的單細胞或極少分化的 多細胞 ，這是克隆技術(shù)必bu可少的環(huán)節(jié)，而且細胞培養(yǎng)本身就是細胞的克隆。細胞培養(yǎng)技術(shù)是細胞生物學研究方法中重要和常用技術(shù)，通過細胞培養(yǎng)既可以獲得大量細胞，又可以借此研究細胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞的合成代謝、細胞的生長增殖等。
1.細胞復(fù)蘇
將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內(nèi)不斷搖動促進其融化。將融化的細胞移入離心管中，加入37oC預(yù)熱的DMEM*培養(yǎng)基中（其中胎牛血清約為10%），輕輕吹勻，離心，500g離心2min，棄上清液。
加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，制成細胞懸液，接種于培養(yǎng)皿/瓶中，在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2.細胞傳代
當細胞密度達到80%~90%（過早產(chǎn)量不足，過晚細胞狀態(tài)不佳，1:2至1:10以上的比率傳代培養(yǎng)，一般1:3至1:5細胞一代，即從細胞接種到分離再培養(yǎng)的一段時間，非細胞有絲分裂次數(shù)）時，去掉*培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。
加入胰蛋白酶（注意：消化液的量以蓋住細胞最好，最佳消化溫度是37oC。顯微鏡下觀察細胞：倒置顯微鏡下觀察消化細胞，若胞質(zhì)回縮，細胞之間不再連接成片，表明此時細胞消化適度）進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。
加入適量DMEM*培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。
加入DMEM*培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻，吸取10微升進行計數(shù)，然后按照所需細胞量在含5% CO2的細胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。
3.細胞凍存
當細胞密度達到80%~90%時，去掉*培養(yǎng)基，用1X PBS清洗2次。加入胰蛋白酶進行消化，放入細胞培養(yǎng)箱中約2-3min。加入DMEM*培養(yǎng)基終止胰蛋白酶消化，轉(zhuǎn)移至離心管后500g離心2min，棄上清液，再加入DMEM*培養(yǎng)基清洗，棄上清液。加入lml凍存液（90%胎牛血清，10% DMSO。 一般來講血清含量可以在10%-90%之間調(diào)整，凍存液中加入血清一方面可以為細胞提供營養(yǎng)，另一方面可以在細胞凍存過程中提供非滲透性保護物質(zhì)，如蔗糖，白蛋白等從而更好地保護細胞），放入凍存管內(nèi)（管內(nèi)有異丙醇，以保證溫度降低的速度），立即放入4oC冰箱中凍存30min，然后放入-20oC冰箱中凍存30min，再置于-80℃冰箱內(nèi)過夜。
第二天放入液氮中，可以保存至少兩年，如不放人液氮，可以保存三個月。
細胞凍存和復(fù)蘇的原則是：慢凍速融，這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑，會導(dǎo)致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生，從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷，引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓，PH，電解質(zhì)等的改變，進而促使細胞死亡。
Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前，均經(jīng)過嚴格質(zhì)控，每個批次附有詳細完整的《檢測報告》，包括：品名，貨號，批號，血源地，生產(chǎn)日期，保質(zhì)期，pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內(nèi)毒素、無菌檢查（細菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應(yīng)等）、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。
實驗人對于新批次血清，應(yīng)認真審閱《檢測報告》，做好試用前篩選第一步。（如何看懂《檢測報告》，可登陸“締一生物"網(wǎng)站，留言技術(shù)部，得到免費幫助。）
它在國內(nèi)市場經(jīng)歷十幾年，被眾多科研工業(yè)客戶反復(fù)選擇，也是細胞典藏等重大項目十幾年的供應(yīng)品牌
9
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)