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細胞死亡及生長異常

閱讀:905      發布時間:2022-2-28
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1、首先講一下細胞生長緩慢的原因:

a)更換了血清或者培養基,細胞需要一段時間適應一下;

b)由于細胞的特殊種類,培養基中缺少某些生長因子;

c)培養基中有少量真菌或者細菌污染;

d)傳代的時候細胞密度過低;

e)細胞狀態老化;

f)支原體污染。

2、解決上述問題的方法:

a)如果實驗室沒有某種細胞最適宜的培養基,可以先用原培養條件凍存一些,然后逐漸增加新的培養基比例,25%、50%、75%到100%,傳代3-5次后,讓細胞慢慢適應。

b)判斷是不是培養基發生污染,可以先不加抗生素,觀察細胞狀態。

c)增加細胞的接種密度。

d)發現細胞老化的時候,及時更換新的細胞。

e)如果懷疑是支原體污染,一定要隔離疑似污染的培養皿,及時清潔消毒孵箱。

3、造成細胞死亡的原因:

a)細胞消化過度;

b)沒有及時換液,營養成分消耗殆盡;

c)如果前一天細胞的狀態很好,換液之后就全死了,應該考慮是否是培養基或者血清的問題。

4、如何判定細胞是否發生支原體污染:可以選用直接培養法、熒光染色或PCR方法檢測,比較常用的是PCR。當細胞發生支原體污染時,原則上是能夠去除支原體的,但是整個過程耗時耗力,還要考驗個人操作能力。所以如果不是處于細胞存量很少的情況下,建議發現污染時立刻棄掉,重新培養。

5、如果孵箱中只是某種細胞持續性大量死亡,而其他細胞狀態都沒問題的話,基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細胞的真菌或細菌,遇到這種情況,小六兒也不知道該怎么做,只能是先停一段時間看看。。。。。。

6、其他注意事項:每個星期都要更換孵箱底盤中的水(紫外照射后超純水);每兩周消毒一次孵箱:75%酒精擦拭一遍后,再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制);可以在孵箱底部放一個燒杯,里面放入飽和硫酸銅,可以抑制霉菌生長。不過也有人說硫酸銅會改變孵箱的PH值,如果不是孵箱污染的情況很嚴重,建議不要使用。

科研實驗中,細胞的體外培養一直是一個重要環節。細胞要養好,就要用好血清,如Ausbian®特級胎牛血清,它適合各種細胞培養,尤其適合難養細胞,如:干細胞、肝細胞,神經細胞,原代培養、細胞融合、轉染細胞等。

Ausbian®特級胎牛血清所有血清出廠前,均經過嚴格質控,每個批次附有詳細完整的《檢測報告》,包括:品名,貨號,批號,血源地,生產日期,保質期,pH值、滲透壓、血紅蛋白、總蛋白、球蛋白、IgG、內毒素、無菌檢查(細菌、真菌、支原體)、病毒檢查(如BVD、牛腺病毒、細胞病變效應等)、促細胞生長能力、細胞毒性、BVD-1/2抗體檢查等。

實驗人對于新批次血清,應認真審閱《檢測報告》,做好試用前篩選第一步。(如何看懂《檢測報告》,可登陸“締一生物"網站,留言技術部,得到免費幫助。)


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