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研究揭示miR-133a的轉錄調控機制及其在細胞分化中的作用

閱讀:786      發布時間:2020-12-25
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9月9日,學術期刊Cell Death & Disease發表了中國科學院生物物理研究所衛濤濤課題組與美國Creighton大學屠亞平課題組的合作論文,這是衛濤濤課題組與屠亞平課題組長期合作所取得的又一成果。研究人員發現,miR-133a表達的上調促進了線粒體生物發生和肌細胞分化,并進一步通過“定向染色質構象捕獲”(CAPTURE)技術找到了調控miR-133a表達的上游調控因子KAP1,從而加深了對miR-133a轉錄調控機制及重要功能的了解。

microRNA(miRNA)在多種生理及病理生理過程中起著重要的調控作用。在前期工作中,衛濤濤課題組與屠亞平課題組密切合作,通過分子、細胞及動物實驗證明,TGF-β1誘導表達的miR-133a可通過負反饋調節的方式作用于TGF-β1受體及其效應分子,負調控TGF-β1信號通路,從而抑制甚至部分逆轉特發性肺纖維化(IPF)的進程,相關論文于2019年9月11日發表于Cell Death & Disease雜志。

鑒于miR-133a的重要生理及病理生理學作用,探明其調控機制將對治療肺纖維化等相關疾病提供重要的線索。衛濤濤課題組與屠亞平課題組進一步以成肌細胞分化過程中miR-133a動態表達為模型,使用基于CRISPR/Cas9的CAPTURE技術,結合高通量測序及生物信息學分析,系統研究了miR-133a表達的調控機制,發現KAP1相關的轉錄調控復合物可抑制C2C12成肌細胞中miR-133a的表達;敲低KAP1可增加miR-133a的表達,此過程伴隨線粒體生物發生和C2C12成肌細胞分化;miR-133a的上調足以誘導線粒體生物發生和C2C12成肌細胞分化,而miR-133a抑制劑則顯著抑制細胞分化。

該研究*使用CAPTURE技術鑒定了細胞分化過程中調控miR-133a表達的重要因子,為理解microRNA的調控機制提供了新思路。

采用Ausbian進口特級胎牛血清,透析過濾去除10000D以下小分子(如次黃嘌呤和胸腺核苷),避免外源小分子對細胞產生干擾。適合脈沖示蹤實驗(例如同位素標記特定小分子,并加入到培養體系中,以研究細胞代謝),也適合轉染CHO后的篩選等應用。

儲存條件

-20°C凍存。

胎牛血清*解凍后,應按單次習慣用量分裝,分裝后的血清仍-20°C凍存。

若置于4°C的血清,應在一周內用完。

為保證細胞培養的效果,血清和培養基的配置,應遵循“現用現配”原則。配好的培養液,應于一周內用完。

血清避免反復凍融,避免在4°C或更高溫度儲存過久,否則會破壞血清中有效活性成分,影響血清品質。

 

血清融化 專業方法:

目的;更好保留血清中活性成分,使細胞培養更穩定。

推薦血清廠家 專業融化方法(此方法通用,適用于所有種類的血清):

 

注意:

♦ 在水浴過程中,血清的平面要*浸在水中。在融化過程中要慢慢搖動瓶身,使血清混勻,但搖動中盡量不要產生泡沫!

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