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牛血清是營(yíng)養(yǎng)豐富的天然培養(yǎng)基，常用于實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞培養(yǎng)以及以細(xì)胞培養(yǎng)為基礎(chǔ)的生物藥或病毒疫苗的生產(chǎn)。

但由于牛血清又存在引入外源因子的風(fēng)險(xiǎn)，因此，嚴(yán)格遵循生產(chǎn)的GMP規(guī)范，執(zhí)行全面的質(zhì)控檢查，以避免外源污染，這對(duì)于保證血清質(zhì)量至關(guān)重要。

外源因子主要包括微生物、內(nèi)毒素和病毒抗體等。

01、微生物

1. 細(xì)菌和真菌

其中細(xì)菌又分為需氧菌和厭氧菌。

這兩種微生物的檢查又稱為“無(wú)菌檢查”。現(xiàn)多采用培養(yǎng)法。我國(guó)藥典通則1101和美國(guó)藥典USP<71>有關(guān)于無(wú)菌檢查方法的說(shuō)明。

牛血清在生產(chǎn)過(guò)程中，經(jīng)0.22mm孔徑的濾膜過(guò)濾，可*祛除細(xì)菌和真菌，因其大小＞1mm。

2. 支原體

支原體大小介于0.1mm~0.3mm

牛血清在生產(chǎn)過(guò)程中，經(jīng)0.1mm孔徑的濾膜三次過(guò)濾，可*祛除支原體。

支原體檢查也采用培養(yǎng)法，可參看我國(guó)藥典通則3301和美國(guó)藥典USP<63>

3. 病毒

病毒檢查包括細(xì)胞培養(yǎng)法及熒光抗體檢測(cè)。細(xì)胞培養(yǎng)法包括細(xì)胞病變效應(yīng)和血吸附檢查。檢測(cè)多為導(dǎo)致牛常見(jiàn)傳染病的病毒，如牛副流感病毒3 型（PI3)、牛腺病毒（BAV-3 ) 、牛細(xì)小病毒（BPV ) 以及牛病毒性腹瀉病毒（BVD)等。其中，BVD以其發(fā)病率高，亞型不具有細(xì)胞病變效應(yīng)而尤其受到重視。

02、內(nèi)毒素

內(nèi)毒素是革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁成分，主要為脂多糖。內(nèi)毒素對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生刺激，直接導(dǎo)致細(xì)胞凋亡，因此內(nèi)毒素被用來(lái)進(jìn)行血清評(píng)級(jí)。特級(jí)胎牛血清內(nèi)毒素要求≤10EU/ml。但內(nèi)毒素濃度越低越好，尤其是對(duì)于一些“嬌氣”的細(xì)胞。

內(nèi)毒素的檢測(cè)是采用鱟試劑法。

03、病毒抗體

動(dòng)物感染病毒后，會(huì)刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體。感染治愈后，抗體會(huì)長(zhǎng)期存在。病毒抗體會(huì)影響疫苗細(xì)胞苗的毒價(jià)。如豬瘟細(xì)胞苗的生產(chǎn)，就不能用含BVD抗體的牛血清，因該抗體與豬瘟病毒抗原之間會(huì)發(fā)生特異性交叉反應(yīng)。2020版中國(guó)藥典也規(guī)定用于乙腦疫苗生產(chǎn)的新生牛血清，應(yīng)為乙腦抗體陰性。

在牛血清中常通過(guò)【中和試驗(yàn)法】檢查BVD-1和BVD-2抗體。

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2.   七次無(wú)菌過(guò)濾，后三次為0.1 µm無(wú)菌過(guò)濾處理。

3.   質(zhì)控全面，包括無(wú)菌檢查（細(xì)菌、真菌、支原體）、病毒檢查（如BVD、牛腺病毒、細(xì)胞病變效應(yīng)等十二項(xiàng)指標(biāo)）、BVD抗體檢查和促細(xì)胞生長(zhǎng)檢查等，符合動(dòng)物協(xié)會(huì)要求。

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