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方法驗證用100CFU™支原體標準品

閱讀：1746 發布時間：2020-6-11

支原體核酸檢測法（常規PCR、熒光定量PCR）應用于細胞培養、生物制藥工業和細胞治療領域具有很多優勢。和傳統方法比較，它具有①靈敏度高，特異性好。②時間短，2-3小時出結果。③操作簡單等特點，可替代傳統的培養法和DNA染色法。

歐洲藥典（EP 2.6.7）規定，支原體核酸法如要替代【指示細胞培養法】（又稱為DNA染色法），需要驗證核酸法靈敏度達到100CFU/ml，并根據支原體污染發生的頻率，推薦選擇下列9種支原體進行檢測：

據小編市場調查后發現，德國MB公司（全稱Minerva Biolabs）生產的【100CFU^TM靈敏度標準品】廣泛被國內外各大藥廠用于支原體核酸法的方法學驗證，被稱為該領域的“金標準”。

【100CFU^TM靈敏度標準品】為凍干粉形式，一共有10種（見下表），其中涵蓋了歐洲藥典（EP 2.6.7）列舉的9個支原體物種，可用于qPCR和PCR方法的靈敏度以及耐用性驗證，使得核酸法可作為DNA染色法的替代方法。

保存：凍干粉在2-8℃保存

產品特點：

1) 來自英國菌種保藏中心NCTC，為標準支原體株

2) 支原體已滅活，不會對實驗室造成污染，保障細胞實驗室安全

3）傳代次數少，支原體無變異

4）產品為凍干粉，保證其穩定性

5）分析證書（COA）提供該批次GU：CFU比值（支原體基因組/菌落數比值）

注意：

1.使用時，應嚴格遵循說明書操作流程。任何偏離可能會造成結果誤差。

2.加入100CFU標準品的樣品不能超濾濃縮，否則會導致結果不可靠。

3.標準品不建議稀釋。

使用說明：

試劑使用前，先達到室溫平衡。

1. 標準品管離心，以收集凍干粉至管底。

2. 每管加入1ml樣品基質液。

3. 室溫靜置5分鐘。

4. 渦旋振蕩10秒鐘，再離心5秒鐘。

5. 使用合適體積的標準品用于DNA抽提。推薦使用MB公司生產的支原體DNA提取試劑盒（品名：Venor®GeM Sample Preparation Kit）。

6. 使用合適體積的抽提DNA用于PCR擴增。

陰性對照樣品的制備，步驟同上。推薦適當重復試驗，并推薦使用MB公司的常規PCR檢測試劑盒 (品名：Venor®GeM Classic，貨號11-1025/-1050/-1100/-1250) 或qPCR試劑盒 (品名：Venor®GeM qEP，貨號11-9025/-9100/-9250)。