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zui常用的細胞系方法是檢測96孔細胞培養板中蛋白的濃度;另外一個方法是讓細胞在軟瓊脂上生長形成集落,然后利用原位免疫沉淀技術獲得高產細胞。近年來,發展起來的高通量自動化篩選技術也被受關注。
為實現克隆的高表達,在有些情況下外源基因擴增,比如以CHO用作宿主細胞;有些情況則不需要,比如雜交瘤細胞。為了實現外源基因的擴增,將細胞在高濃度的擴增標記(比如dhfr)抑制劑的壓力下生長。細胞存活需要擴增標記。高濃度的抑制劑能夠殺死除擁有多個擴增標記基因以外的絕大多數細胞。在標記基因擴增的過程中,與它相鄰的基因也隨之發生擴增。基因拷貝數的增加導致轉錄和翻譯水平的提高。在這個過程中,某些高產細胞株重組IgG重鏈的轉錄水平成為細胞內zui高。另一方面,過高的蛋白表達可能會超過細胞內蛋白折疊的限度,內質網中發生未折疊蛋白效應導致細胞凋亡。因此沒有建立起與高表達相匹配的其它結構的細胞可能不能存活。
基因擴增后的細胞既含有多個拷貝的外源基因,能高水平的表達目的基因和抗性基因,還具備了強大的蛋白分泌能力。除此之外,高產細胞株還應具備高密度培養和能維持較長平臺期的能力。
基因擴增后的細胞可以視為一個細胞“Pool”,其中含有眾多不同遺傳背景的細胞,或是基因插入位點的不同,或是擴增程度的不同等等。因此基因擴增后下一步是細胞的單克隆化。單克隆化是利用流式細胞儀或有限稀釋法或其他自動化方式(0.2個細胞/孔)將細胞接種到多孔板中。可以認為從某一特定孔里長出的細胞都是由早期的一個細胞分裂而來,他們在遺傳上是同源的。
單克隆化后需要對獲得的細胞系進行初步的評價。主要包括生長特性,產品質量的評價。有些情況下需要將細胞馴化到更接近模式的條件下,進行培養。
3x1.5ml Methyl Alcohol 67-56-1 甲醇標準品
4.5oz 氟化牙粉:氟化鈉/二氧化硅標準品
4.6oz 氟化牙粉:單氟磷酸鈉-碳酸鈣標準品
4.6oz 氟化牙粉:單氟磷酸鈉/磷酸氫鈣標準品
400mg Zidovudine 30516-87-1 齊多夫定標準品
400mg Trehalose 6138-23-4 海藻糖標準品
400mg Tilmicosin 108050-54-0 替米考星標準品
400mg Sucralose 56038-13-2 三氯蔗糖標準品
400mg Sodium Starch Glycolate Type B 9063-38-1 羧甲基淀粉鈉標準品(B型)
400mg Sodium Starch Glycolate Type A 9063-38-1 羧甲基淀粉鈉標準品(A型)
400mg Quinapril Hydrochloride 82586-55-8 鹽酸喹那普利標準品
400mg Octisalate (Octyl Salicylate) 118-60-5 水楊酸乙基己酯標準品
細胞系
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