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小鼠血管平滑肌細胞實驗原理

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小鼠血管平滑肌細胞描述: 
小鼠血管平滑肌細胞增殖能力取決于細胞取材、培養技術、培養條件等綜合因素。請按照正確的培養方法來解凍、傳代,以此保證細胞具備良好的增殖能力,方便您的后繼研究順利進行。 
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞主要功能:
(1)  血管平滑肌細胞的再生能力可引發血管病變。
(2)   細胞表達ICAM-1和VCAM-1,能促進血管壁中炎癥反應并對血管疾病的發展和穩定起著重要作用。
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞與主要病生理變化:
(1)腦動脈硬化。
(2)腦動脈血管瘤。
小鼠腦動脈血管平滑肌細胞的基本特性:
(1) 組織來源于正常小鼠腦動脈組織。
(2) 鑒定:肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色。
(3  原代細胞培養末期液氮凍存。
(4)每凍存管細胞數:>1×106個/管/1ml。
(5)肌動蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫熒光染色驗證。
(6)不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。
質量控制: 本細胞經過了檢測,不含有細菌、真菌、病毒(HIV、HBV、HCV)、支原體。 
培養條件:37℃,5% CO2,PH值7.2~7.4,無菌恒溫培養。 
用途: 本產品只提供給進一步的科研使用,不可應用于治療等其他方面。
細胞相關操作(注意:細胞操作都需嚴格按照無菌操作)
收到復蘇好的貼壁細胞的處理方法:
先從外包裝盒拿出細胞瓶,在細胞瓶表面噴一層酒精,并小心去掉封口膜;
在顯微鏡下觀察細胞狀態,并確定是否染菌,如有染菌,請立即拍照,并將細胞丟掉;
將培養瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養箱中培養4-6小時;
倒掉多余的培養基,留正常體積的培養基;
重新將培養瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養箱中培養過夜
6. 第二天傳代。
收到凍存細胞的處理方法:
1.37°C水浴預熱培養基;
從液氮中取出細胞迅速放入37°C水浴快速解凍(解凍后不要繼續暖細胞);
在超凈臺中加入5ml培養基重懸細胞,1000rpm離心5min;
4.棄上清,加入5ml培養基重懸細胞后轉入T25培養瓶中,輕輕晃勻;
5.置于37°C,5% CO2培養箱中培養(培養瓶蓋沒有透氣孔的話,瓶蓋不要擰太緊);
6.第二天,用新鮮的培養基給細胞換液后繼續培養。
小鼠血管平滑肌細胞傳代
1.當細胞融合度達到80%以上時,給細胞傳代;
2.37°C水浴預熱培養基;
3.在超凈臺中,棄培養基,加入2-5mlPBS清洗細胞后,再加入1ml胰酶消化細胞;
4.顯微鏡下觀察到細胞變圓,有細胞開始脫離瓶壁時,加入5ml培養基終止消化;
5.用移液器輕輕吹下瓶壁上剩余的細胞,并輕輕吹打將細胞吹散;
6.將細胞移入離心管中,1000rpm離心5min;
7.棄上清,加入15-20ml的培養基重懸細胞后轉入T75培養瓶中或按適當比例傳到T25瓶中(確保細胞貼壁后融合度在25-50%之間),細胞密度在1×104 cells/cm2 (2.5×105 cells/T-25瓶),混勻細胞懸液,確保均勻分布;
8.將培養瓶置于37°C,5% CO2的無菌培養箱中培養。
細胞凍存
1.37°C水浴預熱培養基;
2.消化細胞后給細胞計數:
1)洗凈晾干血小板計數板和蓋玻片,將蓋玻片*覆蓋計數區;
2)充分混勻細胞,取少量(0.1-0.5ml)細胞懸液與等體積的染色液臺盼藍混合,移液器吹吸混合均勻,用移液器取20ul混合液從蓋玻片兩端(與中間凹槽平行的兩端)分別打入細胞,以細胞懸液剛好浸濕蓋玻片為佳;
3)顯微鏡下,數四個計數區的總細胞數,無活性細胞染成藍色,活細胞不被染色;
4)細胞密度=細胞總數/4×10000×2;
這里10000是不變的,因為計數的細胞是在體積為1mm×1mm×0.1mm即10-4cm3計數池內,1cm3=1ml,將四個計數區的細胞數除以4取平均數,乘2是補償加等體積臺盼藍形成的稀釋。
5)細胞活性=活細胞數/細胞總數×100%。
注:細胞密度高時,可調整細胞懸液和臺盼藍的比例,計數時乘以相應的稀釋倍數即可。
3.當細胞密度達到傳代密度且細胞活性在90%以上時,可以凍存細胞。
4.在超凈臺中將要凍存的細胞移入離心管,1000rpm離心5min。
5.棄上清,用90%培養液+10%DMSO的混合液重懸細胞,并調整細胞密度為1-3×106/ml。
6.將細胞懸液分裝到凍存管中(1-1.5ml/管)。
7.將裝有小鼠血管平滑肌細胞的凍存管放入程序降溫凍存盒,-20°C放1-2h后,-80°C過夜,然后快速轉移到液氮中。

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