TFAR19蛋白的表達與臨床疾病

時間：2017-3-30閱讀：168

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1. ELISA法檢測正常人和疾病狀態下，以及疾病的不同時期，血清中TFAR19蛋白水平及其TFAR19自身抗體水平。

材料和試劑：

1. 包被Buffer: pH9.6, 0.05Mol/L碳酸鹽Buffer

2. 洗滌液： pH7.4, 0.15Mol/L PBS 含0.05% Tween 20

3. 封閉液： 3%BSA(用洗滌液配制)

4. 酶標抗體的稀釋：用封閉液稀釋

5. OPD底物Buffer：Na2HPO4.12H2O 1.84g

檸檬酸 0.51g

DDW 100ml

6. 顯色液(現配現用)：底物Buffer 10ml

OPD 2mg

30% H2O2 2ml

7. 終止液 2Mol/L H2SO48. 重組人TFAR19, HRP標記的羊抗人IgG9. ELISA板, Tip, 移液器，ELISA

Reader(OD490nm)，洗板機

操作步驟

1. 用包被Buffer稀釋的重組人TFAR19(1mg/ml)包被ELISA板, 100ml/well, 37°C孵育2h或4°C(一般24h以上)。

2. 洗滌Buffer洗板三次，加入封閉液，200 ml/well ， 37°C孵育2h或4°C。

3. 洗滌Buffer洗板三次，加入不同稀釋度的病人血清(3個重復孔)100ml/well ，37°C孵育1h。設包被Buffer、洗滌Buffer 、封閉液為陰性對照。

4. 洗滌Buffer洗板三次，加入1：2500稀釋的HRP標記的抗人IgG, 100ml/well，37°C孵育1h。

5. 洗滌Buffer洗板三次，加入顯色液，100 ml/well，避光反應10~15min。

6. 加入H2SO4終止反應，50 ml/well。

7. ELISA Reader 讀取OD490 光密度值，分析和比較病人血清和正常血清中TFAR19自身抗體的表達水平。

2. Western blot 分析原發性腫瘤細胞和正常細胞的TFAR19蛋白的表達水平。

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